2015 Fiscal Year Research-status Report
TTRの断片化を活用したFAP病態解明へのブレイクスルーと新規疾患モデル構築
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15K09318
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
植田 光晴 熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (60452885)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
水口 峰之 富山大学, その他の研究科, 教授 (30332662)
山中 邦俊 熊本大学, 学内共同利用施設等, 准教授 (90212290)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | トランスサイレチン / アミロイド |
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| Outline of Annual Research Achievements |
アミロイド原性の高いTTR81-127を血管平滑筋由来の細胞株であるglomotelに添加すると、細胞表面にコンゴレッド染色陽性で偏光顕微鏡下でアップルグリーンを呈する明確なアミロイド沈着を生じることを確認した。TTR1-80, TTR49-127, TTR全長（野生型、変異型）を加えた場合にはアミロイド沈着は確認されなかった。TTR81-127を用いてハイスループットな細胞培養モデルを確立するために、各種のマイクロプレートを用いたcell-basedアッセイ法を検証した。ハーフウエルサイズの96 wellマイクロプレートを用いて、抗体でTTR沈着量を検証するcell-based ELISA法とアミロイドに特異的に結合し蛍光下で検出可能なcell-based FBS法を確立した。これらの方法で細胞表面に沈着したアミロイドを定量評価することが可能であった。また、継時的に評価したところ、また、これらの方法を用いて細胞毒性、caspase 3を評価したところ、TTR81-127を25 μM以上で負荷した場合にアポトーシスが誘導されることが判明した。
新規のモデル動物とし線虫の体壁に発現させた新規線虫モデルを作成し、体壁へのTTRの凝集や線虫の運動機能の低下、線虫の寿命などを検証している。
各種のC末端側TTRに対する抗TTRペプチド抗体を作成した。これらの抗体を用いて、患者の血液中や各組織で断片化TTRを検出した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
培養細胞モデルや線虫モデルの作成は予定通り進行している。これらのモデルを活用した病態解析も順調に進行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在の研究を発展させ予定通り進行していく。特に細胞培養モデルを用いて、RNA-seq解析や蛋白質アレイによる網羅的な解析を行い、アミロイド沈着が細胞に及ぼす影響を検証する。線虫モデルに関しては、TTRフラグメント部位別や、細胞外分泌の有無による違いを検証する。これらの解析がある程度進行した後に、新規モデルを活用した治療候補薬のスクリーニングにも着手する。
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| Causes of Carryover |
培養細胞実験や線虫モデルの詳細な病態解析（網羅的な解析）は次年度に実施する事としたため、次年度使用額は生じた。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
RNA-seqやLC-MS/MS解析、プロテインアレイ解析を実施する費用として使用する。
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Research Products
(17 results)
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[Journal Article] Diagnostic significance of cortical superficial siderosis for Alzheimer’s disease in patients with cognitive impairment.2016
Author(s)
Inoue Y, Nakajima M, Uetani H, Hirai T, Ueda M, Kitajima M, Utsunomiya D, Watanabe M, Hashimoto M, Ikeda M, Yamashita Y, Ando Y.
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Journal Title
AJNR Am J Neuroradiol
Volume: 37
Pages: 223-227
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Knee osteoarthritis associated with different kinds of amyloid deposits and the impact of aging on type of amyloid.2016
Author(s)
Yanagisawa A, Ueda M, Sueyoshi T, Nakamura E, Tasaki M, Suenaga G, Motokawa H, Toyoshima R, Kinoshita Y, Misumi Y, Yamashita T, Sakaguchi M, Westermark P, Mizuta H, Ando Y.
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Journal Title
Amyloid
Volume: 23
Pages: 26-32
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Labial salivary gland biopsy for diagnosing immunoglobulin light chain amyloidosis: a retrospective analysis.2016
Author(s)
Suzuki T, Kusumoto S, Yamashita T, Masuda A, Kinoshita S, Yoshida T, Takami-Mori F, Takino H, Ito A, Ri M, Ishida T, Komatsu H, Ueda M, Ando Y, Inagaki H, Iida S.
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Journal Title
Ann Hematol
Volume: 95
Pages: 279-285
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Long-term outcome of patients with hereditary transthyretin V30M amyloidosis with polyneuropathy after liver transplantation.2016
Author(s)
Okumura K, Yamashita T, Masuda T, Misumi Y, Ueda A, Ueda M, Obayashi K, Jono H, Yamashita S, Inomata Y, Ando Y.
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Journal Title
Amyloid
Volume: 23
Pages: 39-45
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Effects of tafamidis treatment on transthyretin (TTR) stabilization, efficacy, and safety in Japanese patients with familial amyloid polyneuropathy (TTR-FAP) with Val30Met and non-Varl30Met: A phase III, open-label study.2016
Author(s)
Ando Y, Sekijima Y, Obayashi K, Yamashita T, Ueda M, Misumi Y, Morita H, Machii K, Ohta M, Takata A, Ikeda S.
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Journal Title
J Neurol Sci
Volume: 362
Pages: 266-271
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Endoscopic findings of the small-bowel lesions in familial amyloid polyneuropathy: a case report.2016
Author(s)
Asakura, K, Yanai S, Nakamura S, Kawasaki, K, Eizuka M, Ishida K, Sugai T, Ueda M, Yamashita T, Ando Y, Matsumoto T.
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Journal Title
Medicine
Volume: 95
Pages: e2896
Peer Reviewed
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[Journal Article] Sources of variation of transthyretin in healthy subjects in East and Southeast Asia: Clinical and experimental evidence for the effect of alcohol on transthyretin metabolism.2016
Author(s)
Jono H, Su Y, Obayashi K, Tanaka Y, Ishiguro A, Nishimura H, Shinriki S, Ueda M, Ikeda K, Yamagata K, Ichihara K, Ando Y; Scientific Committee for the Asia-Pacific Federation of Clinical Biochemistry.
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Journal Title
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Two brothers homozygous for the TTR V30M both presenting with a phenotype dominated by central nervous complications.2015
Author(s)
Uchida Y, Takada K, Tsugu Y, Ueda M, Yamashita T, Ando Y, Kobayashi S, Koike H, Watanabe T, Matsumoto T, Toyoda T, Yamada G, Matsukawa N.
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Journal Title
Amyloid
Volume: 22
Pages: 261-262
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Rapid detection of wild-type and mutated transthyretins.2015
Author(s)
Tasaki M, Ueda M, Obayashi K, Motokawa H, Kinoshita Y, Suenaga G, Yanagisawa A, Toyoshima R, Misumi Y, Masuda T, Yamashita T, Ando Y.
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Journal Title
Peer Reviewed
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