2015 Fiscal Year Research-status Report
翻訳リボソーム親和精製法を用いた膵内分泌細胞遺伝子発現アトラスの作製
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15K09400
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| Research Institution | Keio University |
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Principal Investigator |
小谷 紀子 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (50625332)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中江 淳 慶應義塾大学, 医学部, 准教授 (00344573)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | TRAP法 / 膵内分泌細胞遺伝子発現 / 環境変化 / Foxo1CoRepressor |
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| Outline of Annual Research Achievements |
生理的条件下で細胞の遺伝子発現を解析する方法として翻訳リボソーム親和精製法（Translating ribosome affinity purification: TRAP法）がある。この方法を用いて、生理的条件下および各種病態下（絶食／摂食、普通食／高脂肪食）における膵内分泌細胞（膵α細胞、β細胞およびδ細胞）の遺伝子発現を網羅的に解析し、最終的には膵内分泌細胞の遺伝子発現アトラスを作製する事を目的とし、研究を行っている。本研究により糖代謝メカニズムの解明および将来的には2型糖尿病の発症予防および治療のための新たな創薬標的分子の発見につなげていきたいと考える。現在、EGFP-L10aトランスジェニックマウス（AcGFP-L10a）をRat insulin promoter-Cre (RIP-Cre)、Glucagon-Cre、Somatostatin-Creの各トランスジェニックマウスと掛け合わせ、膵α細胞、β細胞そしてδ細胞特異的トランスジェニックマウス（αAcGFP-L10a、βAcGFP-L10aおよびδAcGFP-L10a）を作製している。αAcGFP-L10aおよびβAcGFP-L10aについては蛍光免疫染色により各々のマウスでEGFPがグルカゴン陽性細胞、およびインスリン陽性細胞で発現していることを確認した。現在予備実験として、αAcGFP-L10aからは膵島を単離し、EGFP抗体を用いて免疫沈降を行ない、ポリソームRNA結合タンパクからmRNAを精製し、IgGで免疫沈降を行ない、コントロールと比較してαAcGFP-L10aではグルカゴン遺伝子発現が著明に高く、インスリン遺伝子発現は変化ないことを確認した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本研究の目標を達成するためには十分量の膵島を単りすることが必要であり、そのためには各群40-50匹のトランスジェニックマウスが必要である。当初の予定よりもトランスジェニックマウスの作製に時間を要している。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初の計画通り、各トランスジェニックマウスを作製し、膵島を単離し、翻訳リボソーム親和精製法（TRAP法）を用いて、α細胞、β細胞およびδ細胞の遺伝子発現を網羅的に解析し、膵内分泌細胞の遺伝子発現アトラスを作製する。トランスジェニックマウスを早急に作製し、絶食/摂食、通常食/高脂肪食の各条件下での遺伝子発現変化を解析する。さらに、Foxo1と結合する蛋白として同定したFoxo1CoRepressor(FCoR)が耐糖能異常、インスリン分泌低下、グルカゴン分泌亢進、およびα細胞量の増加を示すことから、Fcorノックアウトマウスと各EGLP-L10aトランスジェニックマウスを掛け合わせ、FCoRをノックアウトする事による単離膵島における遺伝子発現の変化を解析する。
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Research Products
(8 results)
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[Presentation] Foxo1 regulates alpha-cell mass through DNA methylation of Arx promoter cooperated with Foxo1 CoRepressor (FCoR)2016
Author(s)
Noriko Kodani, Jun Nakae, Yoshinaga Kawano, Lisa Ohira, Tetsuhiro Kikuchi, Motoko Matsuzaki, Nobuko Goto, Ayako Shigeta, Kazumasa Yagi, Tadahiro Kitamura, Hiroshi Itoh
Organizer
American Diabetes Association 76th Scientific sessions
Place of Presentation
Huston, USA
Year and Date
2016-06-09 – 2016-06-14
Int'l Joint Research
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[Presentation] Foxo1 CoRepressor (FCoR) regulates α-cell mass and maintain β-cell identity in cooperation with Foxo12015
Author(s)
Noriko Kodani, Jun Nakae, Yoshinaga Kawano, Lisa Ohira, Tetsuhiro Kikuchi, Motoko Matsuzaki, Nobuko Goto, Ayako Shigeta, Kazumasa Yagi, Tadahiro Kitamura, Hiroshi Itoh
Organizer
KEYSTONE SYMPOSIA Diabetes: New Insights into Molecular Mehcanisms and Therapeutic Strategies
Place of Presentation
ウェスティン都ホテル京都（京都市東山区）
Year and Date
2015-10-25 – 2015-10-29
Int'l Joint Research
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[Presentation] Foxo1 CoRepressor (FCoR) regulates α-cell mass via epigenetic regulation of Aristaless-related Homeobox (Arx) gene2015
Author(s)
Noriko Kodani, Jun Nakae, Yoshinaga Kawano, Lisa Ohira, Tetsuhiro Kikuchi, Motoko Matsuzaki, Nobuko Goto, Ayako Shigeta, Kazumasa Yagi, Tadahiro Kitamura, Hiroshi Itoh
Organizer
American Diabetes Association 75th Scientific sessions
Place of Presentation
Boston, USA
Year and Date
2015-06-04 – 2015-06-09
Int'l Joint Research
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