エネルギーバランスにおける報酬系GABABシステムの機能解析

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K09426
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 有馬 寛 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (50422770)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 後藤 資実 名古屋大学, 医学部附属病院, 病院講師 (00621632) ; 坂野 僚一 名古屋大学, 医学部附属病院, 講師 (80597865)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: ノックアウトマウス / GABAB / ドーパミン / 線条体

Outline of Annual Research Achievements

GABAB1受容体をloxP配列ではさんだノックインマウス (GABABflox/flox マウス)とドーパミンニューロン特異的にCreが発現するDopamine transporter (DAT)-Cre マウス（Bäckman CM et al., 2006 Genesis）を交配し、得られたGABAB+/flox DAT-Cre マウスをさらにGABABflox/flox マウスと交配し、GABAB flox /flox DAT-Cre マウス、すなわちドーパミンニューロン特異的GABAB受容体ノックアウトマウスを作成した。また、側坐核を含む線条体特異的にCreを発現するGpr88-Creマウス（Hisatsune C et al., 2013 Transgenic Res）とGABABflox/flox マウスを交配して得られたGABAB+/flox Gpr88-Cre マウスをさらにGABABflox/flox マウスと交配し、GABAB flox /flox Gpr88-Cre マウス、すなわち線条体特異的GABAB受容体ノックアウトマウスも作成した。ドーパミンニューロン特異的GABAB受容体ノックアウトマウスでは腹側被蓋野を含む中脳を、線条体特異的GABAB受容体ノックアウトマウスでは線条体からDNAを抽出し、ネガティブコントロールとしてそれ以外の脳組織からもDNAを用い、GABAB遺伝子特異的なプライマーを用いたPCRでGABAB遺伝子が腹側被蓋野あるいは線条体で特異的にノックアウトされていることを確認した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

組織特異的なGABABノックアウトマウスが作成できたため。

Strategy for Future Research Activity

Creの発現によりloxP配列の組み換えが起こるとGFPを発現するマウス [Ito Y et al., 2013 J Ｎeurosci, 既に入手済み]とそれぞれのノックアウトマウスを交配し、得られたマウスから腹側被蓋野や線条体を含む脳切片を作成してGFPの発現を検討することにより、リコンビネースＣｒｅ が腹側被蓋野あるいは線条体特異的に発現していることを確認する。また、GABAB受容体の抗体を用い、免疫染色法にても組織特異的にGABAB受容体がノックアウトされていることを確認する。