β3インテグリン機能発現におけるキンドリンの役割解明と新たな因子の探索・同定

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K09463
• Research Institution: National Cardiovascular Center Research Institute
• Principal Investigator: 本田 繁則 国立研究開発法人国立循環器病研究センター, 研究所, 室長 (00303959)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 宮田 敏行 国立研究開発法人国立循環器病研究センター, 病院, シニア研究員 (90183970)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: インテグリン / シグナル伝達

Outline of Annual Research Achievements

β３インテグリンは血液細胞（血小板など）、血管構成細胞、腫瘍細胞などに発現する接着受容体であり、血栓症や血管病の発症･進展および腫瘍の浸潤･転移において重要な役割を果たしている。しかしながら、インテグリン機能発現における分子機構の詳細は明らかではない。申請者らは発現クローニング法によりintegrin-linked kinase（ILK）がインテグリン活性化に関わる因子の１つとして同定し報告した。本研究では、ILK結合タンパク質の１つである細胞内タンパク質キンドリンに着目し、インテグリン機能発現に関わるメカニズムを明らかにする。また、キンドリンが関連する細胞内タンパク質および新たなインテグリン機能発現因子の探索･同定とその機能解析などの基礎的研究を行い、創薬シーズとして展開することを目的にしている。
今回はキンドリン-3欠損細胞株の作製に取り組んだ。キンドリン-3を発現するヒト慢性骨髄性白血病細胞（K562細胞）にCRISPR/Cas9ゲノム編集法を用いて欠損株を樹立した。K562細胞はβ１インテグリンを発現する細胞である。本細胞においてアゴニスト刺激によりβ１インテグリンの活性化が誘導された。一方、樹立したキンドリン-3欠損細胞ではβ１インテグリンの活性化に障害がみられた。次に、ヒト巨核球系白血病細胞を用いてキンドリン-3欠損細胞の樹立に取り組んでいる。本細胞はβ３およびβ１インテグリンを発現している。これまで、アゴニストの刺激によりいずれのインテグリンも活性化されることを観察できた。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

細胞株の遺伝子導入効率が悪いことや細胞の多様性などにより目的細胞株樹立に時間を要している。

Strategy for Future Research Activity

これまでの実験を継続して行う。
種々変異型キンドリンの作製と機能解析、キンドリン-3相互作用タンパク質に関する解析実験などを進める。

Causes of Carryover

予定していた消耗品をより安価なもので購入し、節約して使用した。

Expenditure Plan for Carryover Budget

比較的高額な消耗品の購入（ゲノム編集キット、RNAi試薬、エレクトロポレーション試薬、抗体など）、学会参加に関連した使用を計画している。

Research Products

• [Journal Article] Genetic variations in complement factors in patients with congenital thrombotic thrombocytopenic purpura with renal insufficiency. (2016)
  • Author(s): Fan X, Kremer Hovinga JA, Shirotani-Ikejima H, Eura Y, Hirai H, Honda S, Kokame K, Taleghani MM, von Krogh AS, Yoshida Y, Fujimura Y, Lammle B, Miyata T
  • Journal Title: Int J Hematol Volume: 103 Pages: 283-291
  • DOI: 10.1007/s12185-015-1933-7
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant