組織浸潤アロT細胞の標的抗原とクロノタイプに着目したGVHDバイオマーカーの開発

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K09498
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 村田 誠 名古屋大学, 医学部附属病院, 講師 (40378063)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 造血幹細胞移植 / GVHD / T細胞 / T細胞受容体 / 抗原

Outline of Annual Research Achievements

GVHD発症に関与するドナーT細胞についてより正確に評価するためには、アロ抗原特異的な細胞傷害活性を有し、かつ実際にGVHD組織に浸潤しているT細胞分画に着目して解析することが望ましい。本研究では、GVHD組織や末梢血からT細胞を採取しTCRクロノタイピングを行うと同時に、機能解析によりアロ反応性を有することが確認されたT細胞分画に限定したTCRクロノタイピングも行うことで、GVHD組織や末梢血などにおけるアロ抗原特異的T細胞頻度の経時的変化を明らかにし、さらに臨床経過と照合することで、GVHDの重症化や治療反応性を予測可能にするバイオマーカーの開発を目指している。今年度は以下の成果を得た。
1. 造血幹細胞移植患者3名のGVHD組織（皮膚等）からT細胞を分離し、limiting dilution法を用いてT細胞をクローン化、増幅し、さらに患者とドナーの細胞を標的とするCr放出試験により、それらT細胞クローンのアロ反応性を評価した。
2. 同じGVHD組織からRNAを抽出し、次世代シークエンサーを用いてTCRのtarget deep sequenceを行った。1で得たT細胞クローンのTCRをSanger sequence法で決定し照合することで、GVHD組織に浸潤するT細胞全体におけるアロ反応性T細胞の頻度（割合）を決定した。
3. またそれらの患者の末梢血単核球を経時的に採取し、RNAを抽出し、TCRのtarget deep sequenceを行うことで、末梢血中の組織浸潤アロ反応性T細胞の頻度の推移を決定した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

これまでのところほぼ計画通りに進捗している。解析した3名のうち1名については、組織浸潤T細胞全体におけるアロ反応性T細胞の頻度を既に決定済みであり、興味深い結果が得られている。ただし皮膚の生検検体は比較的得られやすいものの、今年度は肝GVHD組織を得ることができなかった。

Strategy for Future Research Activity

実験方法は既に確立済みであり、今後はさらに多くの生検検体を解析するとともに、得られたアロ反応性T細胞の標的抗原の同定も進める。先述のとおり検体収集が今後の重要な課題である。HLA一致移植と不一致移植とで組織浸潤T細胞のTCRレパトアに差があるのか、それぞれ経時的にどのような変化を来すのか、標的とする抗原に一定の傾向はあるのかなどについても解析を進める。最終的には臨床経過と照合して新しいGVHDバイオマーカーの開発を目指す。

Causes of Carryover

購入する予定だった物品（消耗品）が、当該年度内に納品することが不可能となり、その支払い予定額を次年度に繰り越したため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

上述のとおり、物品（消耗品）に使用する。

Research Products

• [Journal Article] Risk factors and prognosis of hepatic acute GvHD after allogeneic hematopoietic cell transplantation. (2016)
  • Author(s): Arai Y, Kanda J, Nakasone H, Kondo T, Uchida N, Fukuda T, Ohashi K, Kaida K, Iwato K, Eto T, Kanda Y, Nakamae H, Nagamura-Inoue T, Morishima Y, Hirokawa M, Atsuta Y, Murata M.
  • Journal Title: Bone Marrow Transplant Volume: 51 Pages: 96-102
  • DOI: 10.1038/bmt.2015.205.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Influence of melphalan plus fludarabine-conditioning regimen in elderly patients aged >55 years with hematological malignancies. (2016)
  • Author(s): Miyao K, Sawa M, Kuwatsuka Y, Ozawa Y, Kato T, Kohno A, Sao H, Nishida T, Iida H, Naito K, Tsurumi H, Taji H, Mizuta S, Kusumoto S, Nakase K, Morishita Y, Kawashima N, Miyamura K, Murata M.
  • Journal Title: Bone Marrow Transplant Volume: 51 Pages: 157-160
  • DOI: 10.1038/bmt.2015.235.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Bone marrow-derived mesenchymal stem cells (JR-031) for steroid-refractory grade III or IV acute graft-versus-host disease: a phase II/III study. (2016)
  • Author(s): Muroi K, Miyamura K, Okada M, Yamashita T, Murata M, Ishikawa T, Uike N, Hidaka M, Kobayashi R, Imamura M, Tanaka J, Ohashi K, Taniguchi S, Ikeda T, Eto T, Mori M, Yamaoka M, Ozawa K.
  • Journal Title: Int J Hematol Volume: 103 Pages: 243-250
  • DOI: 10.1007/s12185-015-1915-9.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A comparison of tacrolimus and cyclosporine combined with methotrexate for graft-versus-host disease prophylaxis, stratified by stem cell source: a retrospective nationwide survey. (2016)
  • Author(s): Sakai R, Taguri M, Oshima K, Mori T, Ago H, Adachi S, Morita S, Taniguchi S, Fukuda T, Ohashi K, Eto T, Miyamura K, Iwato K, Kobayashi N, Kanamori H, Morishima Y, Nagamura-Inoue T, Sakamaki H, Atsuta Y, Murata M.
  • Journal Title: Int J Hematol Volume: 103 Pages: 322-333
  • DOI: 10.1007/s12185-016-1939-9.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Impact of conditioning intensity and TBI on acute GVHD after hematopoietic cell transplantation. (2015)
  • Author(s): Nakasone H, Fukuda T, Kanda J, Mori T, Yano S, Kobayashi T, Miyamura K, Eto T, Kanamori H, Iwato K, Uchida N, Mori S, Nagamura T, Ichinohe T, Atsuta Y, Teshima T, Murata M.
  • Journal Title: Bone Marrow Transplant Volume: 50 Pages: 559-565
  • DOI: 10.1038/bmt.2014.293.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Prophylactic and therapeutic treatment of graft-versus-host disease in Japan. (2015)
  • Author(s): Murata M.
  • Journal Title: Int J Hematol Volume: 101 Pages: 467-486
  • DOI: 10.1007/s12185-015-1784-2.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Chimerism status after unrelated donor bone marrow transplantation with fludarabine-melphalan conditioning is affected by the melphalan dose and is predictive of relapse. (2015)
  • Author(s): Imahashi N, Ohashi H, Terakura S, Miyao K, Sakemura R, Kato T, Sawa M, Yokohata E, Kurahashi S, Ozawa Y, Nishida T, Kiyoi H, Watamoto K, Kohno A, Kasai M, Kato C, Iida H, Naoe T, Miyamura K, Murata M
  • Journal Title: Ann Hematol Volume: 97 Pages: 1139-1148
  • DOI: 10.1007/s00277-015-2312-4.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Integration of humoral and cellular HLA-specific immune responses in cord blood allograft rejection. (2015)
  • Author(s): Hanajiri R, Murata M, Sugimoto K, Murase M, Sakemura R, Goto T, Watanabe K, Imahashi N, Terakura S, Ohashi H, Akatsuka Y, Kurahashi S, Miyamura K, Kiyoi H, Nishida T, Naoe T.
  • Journal Title: Bone Marrow Transplant Volume: 50 Pages: 1187-1194
  • DOI: 10.1038/bmt.2015.119.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Age influences post-graft-versus-host disease non-relapse mortality in adults with acute graft-versus-host disease of varying severity following allogeneic hematopoietic cell transplant. (2015)
  • Author(s): Nakane T, Fukuda T, Kanda J, Taniguchi S, Eto T, Ohashi K, Nakamae H, Kurokawa M, Mori T, Morishima Y, Nagamura-Inoue T, Sakamaki H, Atsuta Y, Murata M.
  • Journal Title: Leuk Lymphoma Volume: 56 Pages: 2392-2397
  • DOI: 10.3109/10428194.2015.1009056.
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Potential value of low-dose ATG treatment for steroid-resistant acute GVHD. (2016)
  • Author(s): Murata M, Ikegame K, Ogawa H, Nakamae H, Ikeda T, Nishida T, Inoue M, Eto T, Ichinohe T, Atsuta Y, Teshima T, Morishita Y.
  • Organizer: 2016 BMT Tandem Meetings
  • Place of Presentation: Honolulu (USA)
  • Year and Date: 2016-02-18 – 2016-02-22
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Adoptive transfer of WT1-specific TCR gene-transduced lymphocytes in patients with myelodysplastic syndrome and acute myeloid leukemia. (2015)
  • Author(s): Tawara I, Masuya M, Kageyama S, Nishida T, Terakura S, Murata M, Fujiwara H, Akatsuka Y, Ikeda H, Miyahara Y, Tomura D, Nukaya I, Takesako K, Emi N, Yasukawa M, Katayama N, Shiku H.
  • Organizer: 57th ASH Annual Meeting and Exposition
  • Place of Presentation: Orlando (USA)
  • Year and Date: 2015-12-04 – 2015-12-08
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] A phase 1/2 study of WT1 peptide cancer vaccine WT4869 in patients with myelodysplastic syndromes (MDS). (2015)
  • Author(s): Suzuki T, Ueda Y, Ogura M, Uchida T, Ozawa K, Miyakoshi S, Naoe T, Murata M, Kizaki M, Uike N, Abe Y, Hidaka M, Tagashira S, Tsuchiya S, Ohyashiki K, Miyazaki Y.
  • Organizer: 57th ASH Annual Meeting and Exposition
  • Place of Presentation: Orlando (USA)
  • Year and Date: 2015-12-04 – 2015-12-08
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] A novel strategy of switching on/off CD19CAR expression under Tetracycline based system. (2015)
  • Author(s): Sakemura R, Terakura S, Watanabe K, Miyao K, Koyama D, Goto T, Hanajiri R, Nishida T, Murata M, Kiyoi H.
  • Organizer: 57th ASH Annual Meeting and Exposition
  • Place of Presentation: Orlando (USA)
  • Year and Date: 2015-12-04 – 2015-12-08
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] PD-L1 on Antigen-Presenting Cells Facilitate the Induction of Antigen-Specific Cytotoxic T Lymphocytes. (2015)
  • Author(s): Goto T, Nishida T, Miyao K, Koyama D, Sakemura R, Hanajiri R, Watanabe K, Imahashi N, Terakura S, Murata M, Kiyoi H.
  • Organizer: 57th ASH Annual Meeting and Exposition
  • Place of Presentation: Orlando (USA)
  • Year and Date: 2015-12-04 – 2015-12-08
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Detecting donor-reactive T cell clones involved in cord blood allograft rejection. (2015)
  • Author(s): Murata M, Hanajiri R, Koyama D, Miyao K, Sakemura R, Goto T, Watanabe K, Terakura S, Nishida T, Kiyoi H.
  • Organizer: The 20th annual congress of Asia-Pacific Blood and Marrow Transplantation Group
  • Place of Presentation: 万国津梁館（沖縄県、名護市）
  • Year and Date: 2015-10-30 – 2015-10-31
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Roles of PD-L1 on antigen-presenting cells for the generation of antigen-specific T cells. (2015)
  • Author(s): 後藤辰徳, 西田徹也, 高木えり奈, 宮尾康太郎, 小山大輔, 酒村玲央奈, 葉名尻 良, 渡邊慶介, 今橋伸彦, 寺倉精太郎, 村田 誠, 清井 仁.
  • Organizer: 第77回日本血液学会学術集会
  • Place of Presentation: 石川県立音楽堂、他（石川県、金沢市）
  • Year and Date: 2015-10-16 – 2015-10-18
• [Presentation] Inducible CD19 CAR expression under tetracycline-based regulation system. (2015)
  • Author(s): 酒村玲央奈, 寺倉精太郎, 渡邊慶介, 宮尾康太郎, 小山大輔, 後藤辰徳, 葉名尻 良, 西田徹也, 村田 誠, 清井 仁.
  • Organizer: 第77回日本血液学会学術集会
  • Place of Presentation: 石川県立音楽堂、他（石川県、金沢市）
  • Year and Date: 2015-10-16 – 2015-10-18
• [Presentation] Tracking donor-reactive T cell clones by deep sequencing in cord blood allograft rejection. (2015)
  • Author(s): 葉名尻 良, 村田 誠, 宮尾康太郎, 小山大輔, 酒村玲央奈, 後藤辰徳, 渡邊慶介, 寺倉精太郎, 西田徹也, 清井 仁.
  • Organizer: 第77回日本血液学会学術集会
  • Place of Presentation: 石川県立音楽堂、他（石川県、金沢市）
  • Year and Date: 2015-10-16 – 2015-10-18
• [Presentation] 急性GVHDの予防. (2015)
  • Author(s): 村田 誠.
  • Organizer: 第77回日本血液学会学術集会
  • Place of Presentation: 石川県立音楽堂、他（石川県、金沢市）
  • Year and Date: 2015-10-16 – 2015-10-18
  • Invited
• [Book] 今日の治療指針2016 (2016)
  • Author(s): 村田 誠（多数で共著）
  • Total Pages: 2096 (684-686)
  • Publisher: 医学書院