組織浸潤アロT細胞の標的抗原とクロノタイプに着目したGVHDバイオマーカーの開発

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K09498
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 村田 誠 名古屋大学, 医学系研究科, 准教授 (40378063)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 造血幹細胞移植 / GVHD / T細胞 / T細胞受容体 / 抗原

Outline of Annual Research Achievements

同種造血幹細胞移植後にGVHDを発症した患者の末梢血やGVHD組織中に含まれるT細胞のTCRクロノタイピングを行うとともに、T細胞をクローニングしてその機能解析を行うことで、GVHD発症時の末梢血やGVHD組織におけるアロ抗原特異的T細胞頻度を定量化する。さらにその経時的変化をGVHD臨床経過と合わせて解析し、GVHDの重症化や治療反応性を予測可能にするバイオマーカーの確立を目指す。今年度は新たに以下の実績を得た。
1. 新たに3名の移植後GVHD患者から皮膚等の生検組織提供を受け、それら組織からT細胞を分離、限界希釈法によりT細胞をクローン化、培養・増幅したのち、それらのアロ反応性を、患者とドナーの細胞を標的とする細胞傷害試験により評価した。
2. 同じGVHD組織からtotal RNAを抽出し、次世代シークエンサーを用いてTCRのtarget deep sequenceを行った。1で得たアロ反応性T細胞クローンのTCR塩基配列と照合することで、GVHD組織におけるアロ反応性T細胞クローンの頻度を解析した。その結果、GVHD組織には非常に限られた種類のアロ反応性T細胞クローンが浸潤していることが分かった。現在は、それらT細胞クローンが、患者間で共通しているのか、あるいは当該患者の異なるGVHD組織間で共通しているのか等について、検討を加えている。
3. 同時期の末梢血中T細胞についても同様にTCRのtarget deep sequenceを行い、組織浸潤アロ反応性T細胞クローンの頻度を解析した。
今後は、GVHDの臨床経過との相関について解析を加えていく予定。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

昨年度からさらに検体を追加して解析することができた。また興味深い結果が得られつつある。ただし、皮膚や消化管（胃、大腸）の生検検体は得られているが、肝GVHD組織が得られなかったため、その点でおおむね順調とした。

Strategy for Future Research Activity

実験系は滞りなく機能しており、データは得られている。今後は、さらに検体を集積して、アロ反応性T細胞頻度の経時的変化を、GVHD臨床経過と合わせて解析することで、新しいバイオマーカーの確立を目指す。

Causes of Carryover

購入予定だった試薬が当該年度内に納品できず、その支払いを次年度に繰り越したため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

上述のとおり、試薬代（消耗品費）として使用する。

Research Products

• [Journal Article] Low-dose thymoglobulin as second-line treatment for steroid-resistant acute GvHD: an analysis of the JSHCT. (2017)
  • Author(s): Murata M, Ikegame K, Morishita Y, Ogawa H, Kaida K, Nakamae H, Ikeda T, Nishida T, Inoue M, Eto T, Kubo K, Sakura T, Mori T, Uchida N, Ashida T, Matsuhashi Y, Miyazaki Y, Ichinohe T, Atsuta Y, Teshima T.
  • Journal Title: Bone Marrow Transplant Volume: 52 Pages: 252-257
  • DOI: 10.1038/bmt.2016.323.
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Impact of graft-versus-host disease on outcomes after unrelated cord blood transplantation. (2017)
  • Author(s): Kanda J, Morishima Y, Terakura S, Wake A, Uchida N, Takahashi S, Ono Y, Onishi Y, Kanamori H, Aotsuka N, Ozawa Y, Ogawa H, Sakura T, Ohashi K, Ichinohe T, Kato K, Atsuta Y, Teshima T, Murata M.
  • Journal Title: Leukemia Volume: 31 Pages: 663-668
  • DOI: 10.1038/leu.2016.288.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Exploratory research for optimal GvHD prophylaxis after single unit CBT in adults: short-term methotrexate reduced the incidence of severe GvHD more than mycophenolate mofetil. (2017)
  • Author(s): Terakura S, Wake A, Inamoto Y, Murata M, Sakai R, Yamaguchi T, Takahashi S, Uchida N, Onishi Y, Ohashi K, Ozawa Y, Kanamori H, Yamaguchi H, Fukuda T, Ichinohe T, Takanashi M, Atsuta Y, Teshima T.
  • Journal Title: Bone Marrow Transplant Volume: 52 Pages: 423-430
  • DOI: 10.1038/bmt.2016.255.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Graft-versus-Host Disease after HLA-Matched Sibling Bone Marrow or Peripheral Blood Stem Cell Transplantation: Comparison of North American Caucasian and Japanese Populations. (2016)
  • Author(s): Kanda J, Brazauskas R, Hu ZH, Kuwatsuka Y, Nagafuji K, Kanamori H, Kanda Y, Miyamura K, Murata M, Fukuda T, Sakamaki H, Kimura F, Seo S, Aljurf M, Yoshimi A, Milone G, Wood WA, Ustun C, Hashimi S, Pasquini M, Bonfim C, Dalal J, Hahn T, Atsuta Y, Saber W.
  • Journal Title: Biol Blood Marrow Transplant Volume: 22 Pages: 744-751
  • DOI: 10.1016/j.bbmt.2015.12.027.
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] A Tet-On Inducible System for Controlling CD19-Chimeric Antigen Receptor Expression upon Drug Administration. (2016)
  • Author(s): Sakemura R, Terakura S, Watanabe K, Julamanee J, Takagi E, Miyao K, Koyama D, Goto T, Hanajiri R, Nishida T, Murata M, Kiyoi H.
  • Journal Title: Cancer Immunol Res Volume: 4 Pages: 658-668
  • DOI: 10.1158/2326-6066.CIR-16-0043.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Programmed Death-ligand 1 on Antigen-Presenting Cells Facilitates the Induction of Antigen-Specific Cytotoxic T Lymphocytes: Application to Adoptive T-Cell Immunotherapy. (2016)
  • Author(s): Goto T, Nishida T, Takagi E, Miyao K, Koyama D, Sakemura R, Hanajiri R, Watanabe K, Imahashi N, Terakura S, Murata M, Kiyoi H.
  • Journal Title: J Immunother Volume: 39 Pages: 306-315
  • DOI: 10.1097/CJI.0000000000000136.
  • Peer Reviewed
• [Presentation] ステロイド抵抗性急性GVHDに対するヒト骨髄由来間葉系幹細胞治療：単一施設における後方視的検討. (2017)
  • Author(s): 村田 誠、松下 正、後藤辰徳、入山智沙子、寺倉精太郎、西田徹也、清井 仁.
  • Organizer: 第16回日本再生医療学会総会
  • Place of Presentation: 仙台国際センター（宮城県、仙台市）
  • Year and Date: 2017-03-07 – 2017-03-09
• [Presentation] 造血幹細胞移植における間葉系幹細胞の臨床応用. (2017)
  • Author(s): 村田 誠.
  • Organizer: 第39回日本造血細胞移植学会総会
  • Place of Presentation: くにびきメッセ（島根県、松江市）
  • Year and Date: 2017-03-02 – 2017-03-04
  • Invited
• [Presentation] Intrabone transplantation of a single cord blood unit using non-irradiated reduced-intensity conditioning. (2016)
  • Author(s): Murata M, Maeda Y, Masuko M, Onishi Y, Endo T, Terakura S, Ishikawa Y, Iriyama C, Ushijima Y, Goto T, Fujii N, Tanimoto M, Kobayashi H, Shibasaki Y, Fukuhara N, Inamoto Y, Suzuki R, Matsushita T, Kodera Y, Kiyoi H, Naoe T, Nishida T.
  • Organizer: The 58th annual meeting of the American Society of Hematology
  • Place of Presentation: San Diego (USA)
  • Year and Date: 2016-12-02 – 2016-12-06
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] 急性GVHDの治療. (2016)
  • Author(s): 村田 誠.
  • Organizer: 第78回日本血液学会学術集会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（神奈川県、横浜市）
  • Year and Date: 2016-10-13 – 2016-10-15
  • Invited
• [Presentation] Low-dose thymoglobulin as second-line treatment for steroid-resistant acute GVHD: a JSHCT analysis. (2016)
  • Author(s): Murata M, Ikegame K, Morishita Y, Ogawa H, Nakamae H, Ikeda T, Nishida T, Inoue M, Eto T, Ichinohe T, Atsuta Y, Teshima T.
  • Organizer: 第78回日本血液学会学術集会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（神奈川県、横浜市）
  • Year and Date: 2016-10-13 – 2016-10-15
• [Presentation] Adoptive transfer of WT1-specific TCR-gene-transduced T lymphocytes in patients with hematological malignancies. (2016)
  • Author(s): 俵 功、藤原 弘、村田 誠、赤塚美樹、西田徹也、寺倉精太郎、恵美宣彦、桝屋正浩、池田裕明、片山直之、安川正貴、影山慎一、珠玖 洋.
  • Organizer: 第75回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（神奈川県、横浜市）
  • Year and Date: 2016-10-06 – 2016-10-08
• [Presentation] ヒトGVHD組織におけるアロ反応性T細胞の解析. (2016)
  • Author(s): 小山大輔、村田 誠、奥野真吾、鴨下園子、Jakrawadee Julamanee、高木えり奈、宮尾康太郎、後藤辰徳、酒村玲央奈、葉名尻 良、寺倉精太郎、西田徹也、清井 仁.
  • Organizer: 第8回血液疾患免疫療法学会学術集会
  • Place of Presentation: 北海道大学医学部（北海道、札幌市）
  • Year and Date: 2016-09-02 – 2016-09-03
• [Presentation] A new strategy to control CD19 CAR; regulation under tetracycline-inducible system allows on-demand CD19 CAR expression and disappearance. (2016)
  • Author(s): 酒村玲央奈、寺倉精太郎、Jakrawadee Julamanee、宮尾康太郎、西田徹也、村田 誠、清井 仁.
  • Organizer: 第7回日本血液学会国際シンポジウム
  • Place of Presentation: 淡路夢舞台国際カンファレンスセンター（兵庫県、淡路市）
  • Year and Date: 2016-05-13 – 2016-05-14
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] 間葉系幹細胞を用いたGVHD治療. (2016)
  • Author(s): 村田 誠.
  • Organizer: 第64回日本輸血・細胞治療学会総会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館（京都府、京都市）
  • Year and Date: 2016-04-28 – 2016-04-30
• [Book] 血液科研修ノート (2016)
  • Author(s): 村田 誠、他（105名）
  • Total Pages: 533 (208-212)
  • Publisher: 診断と治療社
• [Book] 骨髄線維症 (2016)
  • Author(s): 村田 誠、他（23名）
  • Total Pages: 187 (144-150)
  • Publisher: 医薬ジャーナル社
• [Book] 白血病学（下） (2016)
  • Author(s): 村田 誠、他（95名）
  • Total Pages: 582 (359-364)
  • Publisher: 日本臨床社
• [Patent(Industrial Property Rights)] 脂肪組織由来間葉系幹細胞を用いた臍帯血造血幹細胞支持物 (2016)
  • Inventor(s): 中山享之、村田 誠、加藤栄史
  • Industrial Property Rights Holder: 名古屋大学
  • Industrial Property Rights Type: 特許
  • Industrial Property Number: 特願2016-167355
  • Filing Date: 2016-08-29