2015 Fiscal Year Research-status Report
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15K09560
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| Research Institution | National Center for Child Health and Development |
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Principal Investigator |
松本 健治 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 免疫アレルギー・感染研究部, 部長 (60181765)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 好酸球 / リモデリング / プロテアーゼ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
私達はアレルギー性炎症において重要な役割を演じる好酸球がPRSS33（Protease, serine, 33）を特異的かつ恒常的に発現することを見いだした。本研究はこのPRSS33に関して、recombinant PRSS33タンパクを用いたin vitro解析と、CRISPR/Cas9システムによるPRSS33ノックアウトマウスを用いたin vivo解析を行い、好酸球の全く新たな機能を明らかにすることを目的としている。
本年度は、まずバキュロウイルス系を用いて、recombinant PRSS33（rPRSS33）タンパクを作成した。recombinant PRSS33は約30 kDaのタンパクである。PRSS33は構造的にセリンプロテアーゼに類似しており、セリンプロテアーゼ活性を有すると推察される。気管支喘息病態を考慮して、in vitroでrPRSS33を各種気道構成細胞に添加し、その影響を検討した。その結果、rPRSS33は線維芽細胞におけるextracellular matrix proteinのmRNA発現を増強し、その増強はprotease inhibitor cocktail（PIC）の添加によってキャンセルされた。このことから、PRSS33は組織のリモデリングに関与する可能性が示唆された。
また、CRISPR/Cas9システムを用いて、PRSS33ノックアウトマウスを作成した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
初年度はrecombinant PRSS33タンパクを用いたin vitroの機能解析を行った。また、2年度目に予定されているPRSS33ノックアウトマウスを用いたin vivo解析を行うために、CRISPR/Cas9システムを用いて、PRSS33ノックアウトマウスを作成した。これらは全て、当初の研究計画通りの進捗である。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初の研究計画通り、次年度にはPRSS33ノックアウトマウスを用いたin vivo解析を行う。特にPRSS33が発現する好酸球が病態に関与するモデルとして、ダニ抗原の6週間吸入モデルを想定してる。予備検討にて、ダニ抗原の6週間吸入モデルでは気管支肺胞洗浄液中に好酸球が多数浸潤し、かつ気道壁の著しい線維化が認められている。
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| Causes of Carryover |
当初の研究計画通り、本年度はPRSS33ノックアウトマウスを作成した。その際に、予定よる早くPRSS33ノックアウトを得ることが出来たために、その部分の費用が少なくなった。一方、このマウスを交配してin vivo実験に十分な数のマウスを揃えるところまでは進まなかった（飼育費用が少なく済んだ）。そのため、本年度計画していたノックアウトマウスの作成費用（余剰分）と飼育費用を次年度に繰り越して、次年度のノックアウトマウスの詳細な解析に宛てることとした。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
平成28年度には当初の計画通り、十分な匹数のPRSS33ノックアウトマウスを用いて、詳細なin vivoの機能解析を行う。
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[Journal Article] Platelets constitutively express IL-33 protein and modulate eosinophilic airway inflammation.2016
Author(s)
Takeda T, Unno H, Morita H, Futamura K, Emi-Sugie M, Arae K, Shoda T, Okada N, Igarashi A, Inoue E, Kitazawa H, Nakae S, Saito H, Matsumoto K, Matsuda A.
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Journal Title
J Allergy Clin Immunol
Volume: In Press
Pages: In Press
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] An Interleukin-33-Mast Cell-Interleukin-2 Axis Suppresses Papain-Induced Allergic Inflammation by Promoting Regulatory T Cell Numbers.2015
Author(s)
Morita H, Arae K, Unno H, Miyauchi K, Toyama S, Nambu A, Oboki K, Ohno T, Motomura K, Matsuda A, Yamaguchi S, Narushima S, Kajiwara N, Iikura M, Suto H, McKenzie AN, Takahashi T, Karasuyama H, Okumura K, Azuma M, Moro K, Akdis CA, Galli SJ, Koyasu S, Kubo M, Sudo K, Saito H, Matsumoto K, Nakae S.
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Journal Title
Immunity
Volume: 43
Pages: 175-86
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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