2016 Fiscal Year Research-status Report
結核菌抗原による形質細胞様樹状細胞の活性化を介する新しい結核防御免疫機構の解明
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15K09565
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| Research Institution | University of Fukui |
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Principal Investigator |
鈴木 史子 福井大学, 学術研究院医学系部門, 特命助教 (80291376)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
島田 一郎 福井大学, 学術研究院医学系部門, 教授 (20272908)
西山 晃史 新潟大学, 医歯学系, 講師 (80452069)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 結核 / CpGオリゴDNA / 形質細胞様樹状細胞 / 骨髄系樹状細胞 / 共刺激分子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
BCG DNAを模倣する天然型パリンドローム様CpGオリゴDNAである「G9.1」は形質細胞様樹状細胞(pDC)を活性化する。一方、増殖期および休止(潜在)期の結核菌が持続的に発現するDNA結合性タンパク質抗原である Mycobacterial DNA-binding protein 1「MDP1」は、G9.1によるpDCの活性化に対して増強作用を示す。本研究はMDP1抗原とCpG オリゴDNAが、結核防御免疫の成立にどのように関わるのかを明らかにすることを目的としている。
平成28年度は、ヒト末梢血単核球を用いてG9.1による細胞内シグナルの活性化とMDP1の及ぼす影響について検討し、樹状細胞(pDC (Lin-/HLA-DR+/CD11c-/CD304+)、mDC1 (Lin-/HLA-DR+/CD11c+/CD304-/CD1c+/CD141-)、mDC2 (Lin-/HLA-DR+/ CD11c+/CD304-/CD1c-/CD141+))における違いの有無を解析した。pDC、mDC1、mDC2におけるG9.1の取り込みを蛍光標識G9.1を用いてフローサイトメーターにより解析した結果、いずれの細胞群においてもその取り込みを示唆する結果が得られた。また、蛍光標識G9.1とMDP1をプレインキュベーション（昨年度研究成果である最適混合比を採用）してから添加するとpDC、mDC1、mDC2におけるG9.1の蛍光は著しく増強したことから、G9.1の取り込みが亢進されている可能性が示唆された。フローサイトメーターによる解析により、これらの樹状細胞の中でTLR9の発現はpDC特異的であること、またG9.1刺激によるIFNα産生はpDC特異的であることを示唆する結果が得られている。一方、mDC1/mDC2におけるG9.1の作用はpDCとは異なる可能性が示唆されたことから、その活性化シグナル経路の解析を継続している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
G9.1・MDP1の相乗的免疫反応の誘導に最適な混合比については、ヒト末梢血単核球におけるサイトカイン産生量を指標に検討し結果を得た。またEMSA(electrophoresis mobility shift assay)法によりG9.1とMDP1間の直接的な結合とその結合比についての結果を得ている。
G9.1により誘導される樹状細胞の分化成熟におけるMDP1の影響については、共刺激分子やHLA-DRの発現誘導を指標に解析を行い、G9.1/MDP1の濃度依存性と相乗的効果についての結果を得た。さらに共刺激分子(CD80) の発現に関しては、IFNα依存性とクロロキンによる阻害効果についても検討し結果を得ている。
G9.1・MDP1による相乗的活性化については、樹状細胞におけるG9.1の取り込みがMDP1により亢進される可能性を示唆する結果を得ている。
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| Strategy for Future Research Activity |
樹状細胞におけるG9.1の取り込みはMDP1により亢進される可能性が示唆されたことから、G9.1の取り込みと細胞内局在に及ぼすMDP1の影響を検討するために、共焦点レーザー顕微鏡による実験条件をHL60細胞を用いて検討中である。解析手法を確立し、G9.1とMDP1の時空間的作用を検討してそのメカニズムを明らかにしていく。
またG9.1とMDP1の組み合わせにより誘導されるTリンパ球の分化・成熟について解析し、新しい結核防御免疫のメカニズム解明へ繋げたいと考えている。
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