2017 Fiscal Year Annual Research Report
Establishment of Baboon envelope pseudotyped LV vector system to maintain the stemness in stem cell gene therapy.
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15K09676
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| Research Institution | National Center for Child Health and Development |
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Principal Investigator |
内山 徹 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 成育遺伝研究部, 室長 (10436107)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 遺伝子治療 / BaEV / レンチウイルスベクター / ヒト造血幹細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Baboon Envelopeの細胞内ドメインをマウス白血病ウイルスに置き換えたBaEVTRは、細胞毒性を示さずにレンチウイルス（LV）をパッケージングでき、さらにこのウイルスは造血幹細胞に対して高い感染性を示す。造血幹細胞遺伝子治療に特化したLVベクターのパッケージング細胞の作製を目指して、以下の実験を実施した。まず、LVの構成遺伝子（gag-pol、rev）をもつAAVベクタープラスミドを作成し、293T細胞に対してAAV-rep78発現ベクターとともにトランスフェクションシすることでAAVS1サイトへの組み込みを行った。さらに、SIN-レトロウイルスベクターによってBaEVTRを導入することで293T-gpr-BaEV細胞を樹立した。この細胞により作製したLVはCD34陽性造血幹細胞において高い遺伝子導入効率を示した。一方で、徐々にウイルス力価の低下が認められたため、293T-gpr-BaEVにおけるウイルス構成遺伝子の存在をPCRによって調べたところ、gag-pol-rev、BaEVTRとも存在を認め、さらにRT-PCRでも各構成遺伝子の発現を認めた。次に、この細胞にVSV-GとEGFP-LVベクタープラスミドを導入し、Hela細胞に感染させたところEGFPの発現を認めたことから、必要なレベルのgag-pol-revの発現はあると考えられた。さらに、BaEVプラスミドとEGFP-LVベクタープラスミドをトランスフェクションしたところ、CD34陽性細胞に対して十分な感染力を認めた。BaEVの追加導入によって、十分なウイルス粒子の産生が認められることから、作製した293T-gpr-BaEVにおけるBaEVの発現が弱いことが判明した。現在、より強いBaEVの発現も目標に、プロモーターの変更や導入コピー数の増加を行なっている。
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[Journal Article] Somatic MECOM mosaicism in a patient with congenital bone marrow failure without a radial abnormality2018
Author(s)
Osumi T, Tsujimoto S, Nakabayashi K, Taniguchi M, Shirai R, Yoshida M, Uchiyama T, Nagasawa J, Goyama S, Yoshida T, Tomizawa T, Kurokawa M, Matsubara Y, Kiyokawa N, Hata K, Kato M
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Journal Title
Pediatr Blood Cancer
Volume: 65
Pages: e26959
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Blastic transformation of juvenile myelomonocytic leukemia caused by the copy number gain of onocogenic KRAS2017
Author(s)
Osumi T, Kato M. Ouchi-Uchiyama M, Tomizawa D, Kataoka K, Fuji Y, Seki M, TAkita J, Ogawa S, Uchiyama T, Ohki K, Kiyokawa N
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Journal Title
Pediatr Blood Cancer.
Volume: -
Pages: -
DOI
Peer Reviewed
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