局所蛋白過剰発現による深部静脈血栓の形成機序解析と治療法の確立

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K09963
• Research Institution: University of Miyazaki
• Principal Investigator: 古小路 英二 宮崎大学, 医学部, 講師 (00423723)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山下 篤 宮崎大学, 医学部, 助教 (90372797)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 血栓 / 遺伝子導入

Outline of Annual Research Achievements

本研究は、カテーテルを用いた遺伝子導入による局所治療を想定し、ラット生体内にて臨床に近い性状の静脈血栓を形成した後、血栓溶解および蛋白過剰発現による局所での静脈血栓抑制効果の評価を目的としている。平成28年度は平成27年度の実験に引き続き、組み換えアデノウイルスの作製と並行し、培養血管壁細胞を用いた遺伝子導入による蛋白発現評価、血小板凝集抑制効果、細胞機能への影響評価、ベクターの力価確認を行った。また、生体内実験としてラット下大静脈を用いた血栓モデルの作成、評価を開始した。
１）培養細胞への導入実験：目的蛋白の発現プラスミドおよび遺伝子組換えアデノウイルスによる遺伝子導入効率を培養細胞にて検討した。培養細胞にはヒトの血管内皮細胞および平滑筋細胞を使用した。この細胞に対し遺伝子導入を行い、遺伝子導入の効率、目的蛋白の発現、活性の評価を行った。結果として、蛋白の発現および血小板凝集反応への影響を確認した。血管内皮細胞に関しては、培養条件やロットの差異などが実験結果に影響していることが示唆されたため、この点を中心に評価を行っている。
２）動物実験モデルの作製：SDラット（♂、生後10週）の下大静脈を露出・結紮し、血栓モデルを作成した。対照評価として頸動脈結紮による動脈血栓の形成も行った。また、一部には組換えアデノウイルスを用いて遺伝子導入を行った。遺伝子導入は30分間のクランプにて行った。現在血栓の性状評価を行っている。この評価により、結紮の部位や時間等の評価を行い、再検討予定である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

おおむね実験計画どおりに進行しているが、培養細胞では培養条件や細胞の種類、またラットを用いた実験では結紮の条件などの点で、再評価が必要である。

Strategy for Future Research Activity

実感内容に関して若干の修正をしつつ、生体内外での評価を継続する予定である。