2017 Fiscal Year Research-status Report
微量検体からの遺伝子変異診断による消化管間質腫瘍の新規治療戦略
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15K10038
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| Research Institution | Nippon Medical School |
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Principal Investigator |
萩原 信敏 日本医科大学, 医学部, 講師 (00328824)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤田 逸郎 日本医科大学, 医学部, 講師 (10287740)
松谷 毅 日本医科大学, 医学部, 准教授 (50366712)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 消化管間質腫瘍 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
胃などの消化管に多く発生する消化管腫瘍の一つである消化管間質腫瘍（Gastrointestinal stromal tumor：ＧＩＳＴ）の腫瘍細胞ＤＮＡは、ホットスポット（多発域）Ｈｏｔｓｐｏｔと呼ばれるある特定領域に遺伝子変異が多いことが知られている。今回は、その中でも腫瘍遺伝子変異の中で最も頻度が高いKIT遺伝子のエクソン１１の特定部位の変異に注目して、本研究をすすめてきた。
微量な検体から採取した腫瘍由来ＤＮＡからでも変異ＤＮＡを検出することを可能とするため、増幅効率の良い高感度かつ特異的なＡｓｓａｙを開発することを目的としてきた。
実際の臨床検体組織に応用する前に、正常配列を含む正常配列プラスミドと変異遺伝子配列を含む変異配列プラスミドを作成した。これらのプラスミドＤＮＡは正確なコピー数が事前に測定できるため、これらのＤＮＡを標準コントロールＤＮＡとして用いて、様々なコピー数・希釈率の検体を作成して、増幅等の基礎実験を行い本Ａｓｓａｙでの効率の良いＰＣＲ増幅の条件をはじめに設定した。
次いで、これらの既知のコピー数が判明しているプラスミドを用いて、本Ａｓｓａｙの感度・特異度を検討した。各種条件設定の検討の結果、感度は非常に良好で、特異度も高いＡｓｓａｙ系の確立が可能であった。
更に、実際の臨床でＧＩＳＴサンプルから得られた微量な検体から抽出したＤＮＡを使用しての臨床応用実験においても、同様に高感度で特異性の高いＡｓｓａｙであることが確認された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
基礎実験は比較的順調に行うことが可能であったが、消化管間質腫瘍自体は、高頻度に発生する疾患ではないため、臨床検体の集積が遅れている。
現在も継続的に、実験応用可能な試料を集積している。
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| Strategy for Future Research Activity |
引き続き、実験計画に従いKIT遺伝子のエクソン11の特定遺伝子変異を検出可能な実験系を確立させるため、可能な限り消化管間質腫瘍の臨床検体を集積して、本Assayを応用する予定である。
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| Causes of Carryover |
基礎的実験はおおむね終了しているが、本Ａｓｓａｙを消化管間質腫瘍の臨床検体に応用すべく、実臨床の検体の集積を行っている。
継続的には消化管間質腫瘍の検体を集めているが、高頻度に認める疾患でないため、現在も臨床検体の集積に努めているおり、臨床応用への実験が遅れているため。
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