2015 Fiscal Year Research-status Report

術後感染性合併症に対するRAGE活性化機序の解明と治療法の開発

Research Project

Project/Area Number	15K10092
Research Institution	Nagoya University
Principal Investigator	深谷昌秀名古屋大学, 医学部附属病院, 病院講師 (10420382)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	山口淳平名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (00566987) 梛野正人名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20237564) 國料俊男名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 特任講師 (60378023) 横山幸浩名古屋大学, 医学部附属病院, 講師 (80378091)
Project Period (FY)	2015-04-01 – 2018-03-31
Keywords	RAGE / 術後感染症
Outline of Annual Research Achievements	ラット胆管結紮モデルにおけるRAGE発現解析閉塞性黄疸の動物モデルであるラット胆管結紮モデルを作成した。胆管結紮1日モデルと胆管結紮7日モデルでは、胆管結紮1日モデルのほうが肝障害は重篤であった。胆管結紮1日モデル、胆管結紮7日モデルのいずれにおいても肝組織でのRAGE(Receptor for advanced glycation end products)の発現が亢進していた。この胆管結紮1日モデルと胆管結紮7日モデルに全肝虚血（20分）/再潅流を行い、6時間後の肝機能について検討した。その結果、胆管結紮のみでは肝障害が軽度であった胆管結紮7日モデルのほうが肝虚血再潅流により肝障害が重篤化していた。胆管結紮7日後/肝虚血再潅流モデルにおいても肝組織でのRAGEの発現が亢進していたが、胆管結紮のみの場合と比較して有意差はなかった。次に胆管結紮7日後/肝虚血再潅流モデルにTLR4阻害剤の投与を行ない、RAGEの発現をPCRにて検討した。TLR4阻害剤の非投与と比較してTLR4阻害剤投与によるRAGEの発現の減弱はPCRにて認めることができなかった。ラット胆管空腸モデルにおける検討胆管炎の動物モデルであるラット胆管空腸モデルを炎症モデルとして作成した。ラット肝切除モデルとラット肝切除/胆管空腸モデルにおいて炎症関連因子について検討した。ラット肝切除/胆管空腸モデルにおいて肝切除後4日、7日目の肝組織で炎症関連因子であるIL( Interleukin) -6, TNF (Tumor necrosis factor)-aの発現亢進を認めた。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason ラット胆管結紮モデルの肝組織でのRAGE(Receptor for advanced glycation end products)の発現が亢進していた。胆管結紮7日後/肝虚血再潅流モデルにおいても肝組織でのRAGEの発現が亢進を認めた。ラット肝切除モデルとラット肝切除/胆管空腸モデルにおいて炎症関連因子について検討した。ラット肝切除/胆管空腸モデルにおいて肝切除後4日、7日目の肝組織で炎症関連因子であるIL( Interleukin) -6, TNF (Tumor necrosis factor)-aの発現亢進を認めた。
Strategy for Future Research Activity	ラット敗血症モデルの血清中には多くのサイトカインが産生され、生体機能へ大きな影響を及ぼしていると考えられる。血清中の炎症系サイトカインの発現の網羅的解析をMultiplexアッセイにて行い、炎症系サイトカインとRAGEの関連性を検討する。 RAGE活性抑制に対するビサボロール有効性に関する検討 Raw細胞にビサボロールを投与した後、LPSを投与し、ビサボロール投与、非投与時におけるRAGEの発現をウェスタンブロティング法、リアルタイムPCR法にて検討する。培養液中の炎症系サイトカインをMultiplexアッセイにて解析し、ビサボロールと炎症系サイトカインの関連性を明らかにする。2種類の敗血症モデルにビサボロールを投与しバクテリアルトランスロケーションおよび敗血症の発症阻止を検討する。敗血症の評価は、術後1時間、4時間、8時間、24時間後に採取した血液中の細菌特異的リボゾーマルRNAをRT-PCR法により測定し行う。また細菌検査、血液生化学検査による評価も行う。Multiplexアッセイを用いてビサボロールの投与、非投与における血清中の炎症系サイトカインの発現を網羅的に解析し、ビサボロールと炎症系サイトカイン、RAGEとの関連性を明らかにする。