2015 Fiscal Year Research-status Report
DNA修復阻害による合成致死性を応用した新たな食道癌化学放射線療法の開発
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15K10101
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
浜井 洋一 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 助教 (90423384)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岡田 守人 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 教授 (70446045)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | DNA修復阻害 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
癌ではDNA損傷・修復機構が密接に関与し治療標的となる。1本鎖と2本鎖DNA切断の修復に関わるPARPとRAD51を標的とし同時に阻害することで，合成致死性による抗腫瘍効果増強が期待できる。
本研究では，①食道癌細胞株において抗癌剤および放射線照射に，PARPとRAD51の阻害を加え，抗腫瘍効果をin vitro, in vivoで評価する。②その過程で，DNA損傷の指標であるγH2AXとDNA切断の修復に関わるRAD51を経時的に測定し抗腫瘍効果の発現・増強メカニズムを解明する。以上を応用し，食道癌に対するDNA損傷・修復機構を標的とした新規化学放射線療法の開発を目的とする。
本年度は、食道癌細胞株における抗癌剤，PARP阻害剤，放射線照射による抗腫瘍効果とγH2AX，RAD51発現の経時的変化の評価を行った。食道癌細胞株にDNA損傷を引き起こす抗癌剤（Cisplatin, 5FU, Camptothecin，temozolomide）を単独および併用添加し，抗癌剤併用の相加・相乗効果を評価した。さらにDNA損傷の指標であるγH2AXとDNA修復蛋白RAD51フォーカスの量的変化 (kinetics) と細胞内動態を経時的に測定し，各抗癌剤の細胞内作用部位と効果発現メカニズムを解析した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
食道癌細胞株にDNA損傷を引き起こす抗癌剤を単独および併用添加し，抗癌剤併用の相加・相乗効果を評価した。さらにDNA損傷の指標であるγH2AXとDNA修復蛋白RAD51フォーカスの量的変化 (kinetics) と細胞内動態を経時的に測定し，各抗癌剤の細胞内作用部位と効果発現メカニズムを明らかにした。現在、PARP阻害剤 (Olaparib, 1,5,10μM (24hr)) を添加し，Olaparibの添加による抗腫瘍効果を評価するとともに，DNA損傷（γH2AX）と修復（RAD51）の継時的変化を解析している。また，PARP阻害剤 の至適投与量および投与時間の検討を行っているが、当初の予定より進捗状況はやや遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後、RNAi法を用い恒常的にRAD51の発現抑制を行い，食道癌細胞株に対する抗腫瘍効果を評価する。①対照群，②抗癌剤投与群，③放射線照射単独群，④Olaparib単独群，⑤抗癌剤＋Olaparib併用群，⑥Olaparib+放射線併用群，⑦抗癌剤＋Olaparib+放射線併用群で抗腫瘍効果の評価を行う。DNA損傷の指標としてγH2AXを継時的に測定。RAD51の変化を確認する。さらに，ヌードマウスにRAD51発現抑制食道癌細胞株を皮下移植し，同様に①対照群，②抗癌剤投与群，③放射線照射単独群，④Olaparib単独群，⑤抗癌剤＋Olaparib併用群，⑥Olaparib+放射線併用群，⑦抗癌剤＋Olaparib+放射線併用群でTumor volumeを測定する。種々のコンビネーションによるin vivoでの抗腫瘍効果を検証する予定である。
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Research Products
(6 results)
