EGFR阻害剤による肝障害進展抑制の機序の解明とその臨床応用

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K10161
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 藤井 努 名古屋大学, 医学系研究科, 准教授 (60566967)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 神田 光郎 名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (00644668) ; 小寺 泰弘 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (10345879) ; 山田 豪 名古屋大学, 医学部附属病院, 病院講師 (30467287)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 肝硬変モデル / ラット / DEN / Erlotinib

Outline of Annual Research Achievements

1.研究代表者らは近年、動物モデルにおいて上皮成長因子受容体（Epidermal Growth Factor Receptor; EGFR）阻害剤による肝硬変抑制効果を確認し報告した（Fuchs BC, Fujii T (equally contributed) et al, Hepatology 2014）。本研究ではこの現象の機序を具体的に解明するとともに、ヒトで肝の硬変化を抑制するという新たな視点からの治療法の構築・開発を目指すものである。
2.当該年度では、以下の2点の研究を実施した。(1)ラットにおける肝硬変抑制モデルの作成と免疫染色による蛋白発現の検討(2)Hepatic Stellate Cell（HSC）マーカーの発現の検討とHSCの単離培養
3.ラットにおける肝硬変抑制モデルの作成と肝臓の摘出：ラットにDiethylnitrosamine (DEN)の腹腔内投与を週1回、18週間行い、肝障害モデルを作成した。さらにそれらを以下のように3群に分けた。Control群（PBSのみ週1回腹腔内投与）、低濃度Erlotinib群（0.5 mg/kgを腹腔内投与、13-18週の毎日）、高濃度Erlotinib群（2 mg/kgを腹腔内投与、13-18週の毎日）。摘出した肝臓において、p-ERKなどのEGFR-RAS-MAPKシグナル伝達系遺伝子の解析が目的である。定量PCR法、Western blot法は前年度に施行した。本年度は免疫染色を行った。
4.Hepatic Stellate Cell（HSC）マーカーの発現の検討とHSCの単離培養：肝線維化に関与するHSCのマーカーであるα-SMA、Desmin、GFAPの発現が、DEN投与により増加し、またErlotinib投与により減少することをWestern blot法および免疫染色にて検討した。すなわち、HSCの活性化が通常通りに同現象に関与していることを確認した。HSCの単離培養を現在試みているところである。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

研究の開始段階であるラットの肝硬変抑制モデルの作成に時間を要した。このモデルの作成には最短で約5ヶ月を要するが、動物の購入・搬入に時間を要したことと、モデルの作成を繰り返して施行せざるを得なかったことが理由である。

Strategy for Future Research Activity

当初の研究計画通りに施行していく予定である。つまり、HSCの単離培養と、Erlotinibによる遺伝子発現の検討、ヒト肝切除検体における遺伝子・蛋白発現の検討と研究を進めていく予定である。

Causes of Carryover

実施計画が予定より少し遅れたため、予定されていた金額まで使用できなかったため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

当初の研究計画通りに施行していく予定であり、次年度に使用できると考えている。