Gene and Cell Therapy for Lymphedema

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K10229
• Research Institution: Asahikawa Medical College
• Principal Investigator: 齊藤 幸裕 旭川医科大学, 医学部, 講師 (80540583)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: リンパ管学

Outline of Annual Research Achievements

１、マウスiPS細胞に対してHGFプラスミドを遺伝子導入し、HGF恒常発現細胞株の確率を試みているが、遺伝子導入効率が極めて低く十分な発現量を確認できる細胞培養系の確率には至っていない。今後はエレクトロポレーション法などを利用して細胞系の確率を目指す。２、上記の細胞培養系の樹立ができていないため、HGF恒常発現iPS細胞のリンパ管内皮細胞への分化実験は実施できていない。３、通常のiPS細胞を、OP-9細胞を利用してリンパ管内皮細胞へ分化させる実験を行っているが、既報のような細胞培養系を得るには至っていない。しかし血管内皮様の細胞は確認できているため、この細胞を利用したリンパ浮腫動物モデルへの再生医療を目指した実験を行っていく。４，マウスリンパ浮腫マウスにiPS細胞とHGFプラスミドを別個に導入した動物実験を試みている。現在遺伝子導入方法や適切な細胞移植法、ならびに評価系の検討を行っており、これが確立次第、実験を行う。５、iPS細胞に一過性にHGF遺伝子を導入し、real time PCRで評価したところ、Sox18、FoxC2、VEGFR-3などのリンパ管発生に関連した遺伝子群の発現上昇を確信した。これは分化したリンパ管内皮細胞においても同様の結果であった。
上記の結果から、iPS細胞へのHGF遺伝子導入やリンパ管内皮細胞への分化は平行して進めていくが、HGFを一過性に発現させるだけでiPS細胞をリンパ管内皮細胞へ文化させる可能性もあると考え、iPS細胞にHGFを一過性に導入した細胞をリンパ浮腫モデルに移植して治療効果を検討することも合わせて行っていくこととした。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

HGF恒常発現iPS細胞の確立、およびiPS細胞をリンパ管内皮細胞へ誘導する方法の確立に非常に手間取っている。

Strategy for Future Research Activity

HGF恒常発現iPS細胞の樹立が困難な場合は、HGF一過性発現のiPS細胞をそのまま、リンパ管内皮細胞への誘導することなしに動物モデルに導入し治療効果を検討する。これまでの検討からHGFを遺伝子導入するだけでリンパ管内皮細胞発生関連の遺伝子群が有意に上昇することがわかっており、これでも十分な治療効果が得られる可能性があるものと考えるに至った。