2016 Fiscal Year Research-status Report
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15K10394
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
内山 茂晴 信州大学, 医学部, 特任教授 (10242679)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
二村 圭祐 大阪大学, 医学系研究科, 准教授 (00462713)
林 正徳 信州大学, 学術研究院医学系, 助教 (20624703)
加藤 博之 信州大学, 学術研究院医学系, 教授 (40204490)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | エストロゲン受容体 / 閉経モデルマウス / 滑膜内腱 / 腱鞘炎 / 腱細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
エストロゲン受容体はERαとERβの2種類が存在する事が知られており、骨組織においては破骨細胞のERαが骨量維持に重要な役割を果たしていることが明らかとなっている。閉経、妊娠などによるホルモンの不均衡は腱鞘炎発症の要因の一つと考えられており，エストロゲン受容体の発現変化が腱鞘炎の病態に関与している可能性がある．しかし，手指の滑膜内腱におけるエストロゲン受容体の発現やその局在は未だ不明である．我々は，初年度に引き続き閉経モデルに用いるマウス(ddyとC57BL6)の滑膜内腱（長趾屈筋腱）において、2種類のエストロゲン受容体が実際に発現しているかどうかをリアルタイムPCRにより調べた．その結果，滑膜内腱においても骨や筋肉など他の組織と同様，ERαとERβが共に発現していることが確認された．また，免疫染色による解析においてもERα、ERβ共に滑膜内腱のエピテノンならびにエンドテノンにおいて腱細胞と思われる細胞に一致して発現が認められた．
閉経モデルマウスを用いた実験では、まず卵巣摘出からサンプル回収までの期間の検討を行った．その結果，卵巣摘出後8週でコントロールマウスと比較して両受容体の発現が上昇する傾向が見られたが，優位な差が得られなかったため，現在引き続き条件検討を含め再現性の確認を行っている．RNA sequenceについては，サンプル回収の至適条件がほぼ得られており，閉経モデルマウスを用いた解析の準備を進めている．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
リアルタイムPCRによる滑膜内腱におけるエストロゲン受容体の発現解析では，当初2種類の受容体のうちERβのみの発現が確認されたが，免疫染色による解析ではERαとERβ両方の発現が観察されたため，RNAの抽出方法を含めたリアルタイムPCRの条件検討を再度行う必要があり，それに予想以上の時間を要してしまった．また，我々の研究グループにおいて，閉経モデルマウス作成は今回初めてであったため，作成のための技術習得とモデル作成からサンプル回収までの期間の検討にも時間を要したことが遅れの原因となっている．
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| Strategy for Future Research Activity |
これまでの研究で，滑膜内腱において2種類エストロゲン受容体が発現している事が確認されたことから，閉経に伴うエストロゲンの変化が何らかの形で滑膜内腱に影響を及ぼしている可能性が示唆された．今後はこれまでに行ってきた研究結果を基に，平成29年度以降に予定している研究を進めていく．
具体的には、閉経モデルマウスとコントロールマウスの滑膜内腱からRNAを抽出し，RNA sequenceによる遺伝子発現の網羅的解析を行う．続いて，シーケンスにより得られたデータの解析とプロファイリングによって変化を認めた遺伝子の定量をリアルタイムPCRにて行い，コントロールマウスとの比較を行う．さらにプロファイリングにて変化を認めた遺伝子の発現部位の確認を免疫染色にて行う．
閉経モデルマウスの滑膜内腱およびその周辺組織において，実際の腱鞘炎の病理像と同様の所見が観察されるかを組織学的に検討する．さらに閉経モデルマウスにおける腱由来幹細胞の性質を特定するために，幹細胞および腱細胞マーカーの定量をリアルタイムPCRにて行う．MTTアッセイおよびコロニーフォーミングアッセイにて増殖能，コロニー形成能を定量し，さらに多分化能を各間葉系細胞への分化誘導培地下で培養し評価する．
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| Causes of Carryover |
閉経モデルマウスの作成とサンプル回収までの期間の検討に時間を要したことなどから，RNA sequenceの委託ができなかったため．
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度使用額は平成29年度請求額と合わせて，RNA sequenceの委託費として使用するとともに，消耗品費として使用する予定である．
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