2017 Fiscal Year Annual Research Report
The role of Cholecystokinin B receptor (CCKBR) in axonal elongation
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15K10397
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| Research Institution | Hamamatsu University School of Medicine |
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Principal Investigator |
長谷川 智彦 浜松医科大学, 医学部附属病院, 講師 (50402368)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | cckbr / sciatic nerve injury |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【KOマウスを用いたコレシストキニンB蛋白の軸索伸長に対する作用確認実験】
7～12週齢のKOマウスおよびWild type(W)マウスを用いる(n=4, respectively計8匹)．左坐骨神経損傷後5日に同側のL3-5のDRGを摘出し，損傷していない対側L3～5のDRGも摘出する.コラゲナーゼ処理をして初代培養神経細胞を作製する．PDLコートプレートにて24時間の培養し，抗βtublin抗体を用いて神経細胞と軸索を染色する．KOマウスの坐骨神経損傷あり群となし群, Wマウスの坐骨神経損傷あり群となし群の4群間で神経発芽率および軸索伸長距離を計測する．計測にはWeizmann Instituteより提供されているソフトウエアNeuroMathを用いる.2018年から徐々にKOマウスを用いた検討を施行しているが、まだデータが揃っていないため昨年までに得られた以下の結果を用いて論文を作成し投稿中である。
①CCKBRの局在実験：抗CCKBR抗体を用いた免疫染色にてCCKBRはDRG細胞膜に局在し、坐骨神経損傷後に発現が増加傾向である。②cckbr遺伝子のPCRデータ：坐骨神経損傷後0, 1, 3, 7, 14日目における後根神経節(L3-5)でのCCKBRmRNAの発現量の経時的変化を観察し3日目に発現が有意に増加し、7日目に最大で0日目の790倍になった。③CCKBRアゴニスト、アンタゴニストを用いた機能獲得、喪失実験：CCKBRアンタゴニスト投与による坐骨神経損傷後の後根神経節培養神経細胞ではコントロールと比較して軸索伸長が180μmから65μm, 発芽率が20%から4%に有意に抑制されたが、アゴニストでは損傷後も有意な差はみられなかった。
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Research Products
(1 results)
