血小板依存的な骨軟部肉腫の増殖・転移機構の解明と新規治療法の開発

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K10436
• Research Institution: University of Yamanashi
• Principal Investigator: 市川 二郎 山梨大学, 総合研究部, 助教 (00456469)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 骨肉腫 / 血小板 / ポドプラニン / ＣＬＥＣ－２

Outline of Annual Research Achievements

骨軟部肉腫領域での化学療法は、この20年間で特段の変化をみない。しかし肺転移が予後因子であるため、骨軟部肉腫の化学療法として、増殖と共に肺転移を抑制する新たな治療法の登場が望まれる。これまでに研究代表者らは、一部の扁平上皮癌等に発現する膜蛋白ポドプラニンは、血小板活性化受容体 ＣＬＥＣー２ に結合して血小板凝集を惹起して、血行性転移を促進することを発見した(Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ. ２８５: ２４４９４ー５０７, ２０１０)。更に、ヒト骨肉腫細胞の高肺転移株ではポドプラニンが高発現し、また高肺転移株のみが血小板凝集を惹起することを見出した。本研究では、これらの成果を更に発展させ、肉腫ポドプラニンと血小板ＣＬＥＣー２を介した血小板活性化が肉腫の増殖・転移に果たす役割を解明し、それを治療へ発展させることが目的である。
平成28年度の計画と研究実績
血小板活性化による肉腫細胞の変化
１)浸潤能への影響；Ｂｏｙｄｅｎ　Ｃｈａｍｂｅｒアッセイを用いる。上層には無血清条件で1.骨肉腫細胞のみ2.骨肉腫細胞と血小板の共培養3.血小板のみのとし、下層には10％FCS入りの基本培地を置く。その結果、骨肉腫細胞と血小板との共培養で最も高い浸潤能が認められた。
２)上皮間葉転換（EMT）への影響；プレートに骨肉腫細胞を播き、1日待機する。培地をFCSなしに変え、洗浄血小板を添加する。その結果、血小板と共培養した骨肉腫細胞では、Ｎカドヘリン、Ｓｎａｉｌなどの間葉系マーカーの発現が見られた。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

血小板と骨肉腫が凝集し、その結果、一つは浸潤能の獲得、もう一つはＥＭＴの促進が認められた。

Strategy for Future Research Activity

実験のまとめとして、マウスモデルへの抗体投与があるので、最終年度にそれを行う予定である。