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2017 Fiscal Year Annual Research Report

Mechanism of glutathione-induced stimulation of osteoclast differentiation

Research Project

Project/Area Number 15K10475
Research InstitutionOkayama University

Principal Investigator

藤田 洋史  岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (20423288)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 小渕 浩嗣  岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 講師 (10304297)
Project Period (FY) 2015-04-01 – 2018-03-31
Keywords破骨細胞 / ゲノム編集
Outline of Annual Research Achievements

本課題について、前年度までに、グルタチオンに関連する破骨細胞分化関連候補分子Aを見出している。また、in vitroおよびin vivoで候補分子の機能を明らかにするために、ゲノム編集技術によるノックアウトマウス作製法の確立を行なってきた。本年度では、グルタチオンに関連する破骨細胞分化関連候補分子Aに加え、候補分子Bを新たに見出した。PCRによりこれらの分子が破骨細胞に発現していることを明らかにした。次に、CRISPR-Cas9 systemを用いて、これら分子のノックアウトマウスの作製を試みた。分子Aについては、PX458ベクターにターゲット配列をクローニング後、これを鋳型としてin vitro transcrptionにてgRNAを合成した。分子Bについては、crRNAおよびtracrRNAをオリゴRNA合成により取得し、アニーリングによりgRNAを調整した。エレクトロポレーションにより、マウス受精卵にCas9 proteinとgRNAを導入後、2細胞期胚を偽妊娠マウスに移植した。得られたF0マウスをジェノタイピングした結果、A,Bいずれの遺伝子も、ゲノム編集が行われていた。これらマウスと野生型マウスを交配させることによりF1マウスの作出を試みたところ、分子AについてはF1マウスが得られた。しかし、分子BについてはF1マウスは得られなかった。分子Aの遺伝子はX染色体上に位置するため、オスF1の一部はノックアウトマウスであった。現在、この個体を用いて破骨細胞の分化および骨吸収能について解析を進めている。

  • Research Products

    (6 results)

All 2018 2017

All Presentation (6 results)

  • [Presentation] ゲノム編集マウスを用いた破骨細胞分化におけるロイコトリエン合成関連遺伝子の機能解析2018

    • Author(s)
      藤田 洋史、長尾 僚祐、土生田宗憲、服部 高子、久保田 聡、大内 淑代
    • Organizer
      第123回日本解剖学会総会・全国学術集会
  • [Presentation] ゲノム編集Fgf10モザイク変異体の組織学的解析2018

    • Author(s)
      土生田宗憲、泰江章博、藤田洋史、板東哲哉、佐藤恵太、親泊政一、田中栄二、大内淑代
    • Organizer
      第123回日本解剖学会総会・全国学術集会
  • [Presentation] 植物性エストロゲンはガン診断マーカープロトポルフィリンIXの排出を抑制する2017

    • Author(s)
      藤田 洋史, 永川 恵介, 小渕 浩嗣, 荻野 哲也, 近藤 洋一, 井上 啓史, 執印 太郎, 内海 俊彦, 内海 耕慥, 佐々木 順造, 大内 淑代
    • Organizer
      第114回岡山医学会総会
  • [Presentation] ノックアウトマウス及びプロテオーム解析を用いたDKK3タンパク質の生理的機能の解明2017

    • Author(s)
      藤田洋史、井上順治、親泊政一、近藤格、公文裕巳、大内淑代
    • Organizer
      第122回日本解剖学会総会・全国学術集会
  • [Presentation] ABCG2 siRNA導入によるがん細胞のアポトーシス誘導2017

    • Author(s)
      小渕 浩嗣、藤田 洋史
    • Organizer
      2017年度生命科学系学会合同年次大会
  • [Presentation] CRISPR/Cas9システムにより作製したモザイク変異マウスの組織学的解析2017

    • Author(s)
      土生田宗憲、泰江章博、藤田洋史、板東哲哉、佐藤恵太、親泊政一、田中栄二、大内淑代
    • Organizer
      2017年度生命科学系学会合同年次大会

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Published: 2018-12-17  

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