2017 Fiscal Year Annual Research Report
Establishment of rapidly testing bacterial gene using PCR lateral flow assay in periprosthetic joint infection
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15K10489
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| Research Institution | Kitasato University |
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Principal Investigator |
内山 勝文 北里大学, 医学部, 准教授 (90286310)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 人工関節周囲感染 / PCRラテラルフロー法 / 迅速細菌遺伝子検査 / 16S-rRNA / シーケンス解析 / MRSA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
人工関節周囲感染の術中迅速細菌遺伝子検査の運用を目的に、PCRラテラルフロー法(PCR-LF法)を用いてfemA、mecA の組み合わせから、ブドウ球菌系3菌種(MSSA、MR-CNS、MRSA)の検出を試みた。同時に臨床データや治療経過、関節液検査(細胞数、糖、CRP値など)、病理組織像から診断した、感染陽性例の細菌培養検査結果と比較した。その結果、PCR-LF法のMSSA、MR-CNS、MRSAの感度の高い検出が可能となったが、特異度は細菌培養検査のほうが優れていた。また、femA、mecAの両者が陰性の場合、その他の菌が存在していても (偽)陰性になってしまうという欠点があった。そこで16S-rRNA遺伝子を増幅することで細菌の存在を確認し、さらにシーケンス解析による塩基配列情報から細菌の種類を類推し、細菌培養結果とシーケンス解析の結果を比較したところ、菌種の検索が十分可能になった。しかし16S-rRNA遺伝子の検出には大腸菌由来の酵素を使用しており、PCRのサイクル数を増やすと大腸菌の遺伝子が検出されてしまう。そこで真核細胞由来のeukaryote-made thermostable DNA polymeraseの提供を受けPCRのサイクル数を上昇させ、シーケンス解析での再評価を行ってきた。またPCR-LF法を用いて、グラム陽性菌16種類、グラム陰性菌9種類の細菌16S-rRNA遺伝子のuniversal プライマーを用いたPCR法と耐性菌で検出頻度が高いMRSA、ESBLの同時スクリーニングに対応するオリジナルの特異的プローブを用いたPCR-LF法を完成させ臨床診断との整合性を検討した。頻度の多い検出菌は十分診断可能であるが、同定できる菌種の数に限界があるため、検出頻度の少ない菌の診断は困難であった。
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Research Products
(5 results)
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[Presentation] Clinical evaluation of efficacy using PCR lateral-flow assay for Gram-positive and Gram-negative bacterial infectiondetection in joint fluid2017
Author(s)
Katsufumi Uchiyama, Hiromi Kanda, Tokiko Yamaguchi, Shiro Ibe, Keizou Sakurai, Shin Nihonyanagi, Yojiro Minegishi, Shinsuke Ikeda, Yusaku Kanou,Kensuke Fukushima,Naonobu Takahira, Masashi Takaso
Organizer
36th Annual meeting of the European Bone and Joint Infection Society
Int'l Joint Research
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