2015 Fiscal Year Research-status Report
急性炎症の初期免疫応答におけるNFkB経路と生体侵襲の評価
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15K10530
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| Research Institution | Yamagata University |
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Principal Investigator |
川前 金幸 山形大学, 医学部, 教授 (70254026)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
後藤 薫 山形大学, 医学部, 教授 (30234975)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 急性炎症応答 / NF-κB / ジアシルグリセロールキナーゼ / 細胞内情報伝達機構 / TNFα |
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| Outline of Annual Research Achievements |
外科的手術、種々の要因による人工呼吸管理、および重症肺炎等において集中治療が選択される場合、その過程における生体炎症の程度が病態の予後に大きな影響を与えることが少なくない。現在の周術期モニターシステムは、薬物の投与時間と連動して血圧や血ガス等の変動を経時的にモニタリングすることを可能にしているが、惹起される炎症応答は個体により大きく異なるので、生体細胞を用いて炎症等を定量的に解析することが出来れば、生体急性炎症メカニズムの解明ひいては臨床応用に非常に有用と思われる。生体侵襲においては、炎症応答を司る主要転写因子NF-kB（Nuclear factor-kappa B）経路が重要な役割を果たす。申請者らの研究グループは細胞内情報伝達機構において、細胞内二次伝達物質ジアシルグリセロール（DG）のリン酸化酵素DGキナーゼ（DGK）に関する機能解析に従事してきた。本研究では、実験動物モデルを用いて臨床医学現場における周術期急性炎症応答をシミュレートし、DGKファミリーならびにNF-kBを指標として、生体急性炎症とその後の回復過程を解析するための実験を行う。まず本年度は、HeLa細胞およびマウス由来のマウス胎児線維芽細胞（MEF）を用いて、NFkB転写経路を解析する実験系を構築した。その結果、DGKζの発現を抑制することにより、NF-kB転写経路が活性化され、NF-kBにより転写調節を受けるTNFαやRANKLのmRNA発現が増加することを明らかにした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本研究では、炎症応答のマスター転写因子とされるNF-kBの制御機構について、申請者らがこれまで取り組んで来た細胞内情報伝達制御因子DGKファミリーに焦点を当て、急性炎症応答の分子機構の解明を目的としている。本年度は、これまで行って来た実験系を整理し、培養HeLa細胞におけるDGKζのノックダウン実験系およびDGKζ-KOマウスから作製したMEF細胞系を用いて、NF-kB経路解析のための実験系を構築した。まず、NF-kBの転写活性を担う主要サブユニットであるp65の細胞内局在解析、それを制御するIKK (Inhibitory kappa B kinase) の発現解析、そしてNF-kB転写活性を測定するルシフェラーゼアッセイ系を整備した。その結果、DGKζ発現減少により、NF-kB経路が活性化されることが明らかとなった。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は、DGKζに引き続き、DGKεとNF-kB経路の関連性を追求する予定である。すなわち、DGKεにおいても、ノックダウン細胞およびDGKε-KOマウスから樹立したDGKε-KO MEF細胞を準備し、NF-kB経路の詳細な検討を行う。また、個体レベルの応答を解析するために、KOマウスを用いた炎症モデルの予備実験も施行する。
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