2015 Fiscal Year Research-status Report
急性肺障害の慢性化過程に動的な生体内レドックスリモデリングが果たす役割の追究
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15K10551
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| Research Institution | The Tazuke Kofukai |
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Principal Investigator |
足立 健彦 公益財団法人田附興風会, 医学研究所 第9研究部, 部長 (90252428)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
広田 喜一 関西医科大学, 医学部, 准教授 (00283606)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 酸素環境 / thioredoxin / TXNIP / HIF-1 / 敗血症 / 急性肺傷害 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
酸素環境が激しく変化する臓器である肺を特に取り上げて生体内レドックス環境が炎症反応の進展に果たす役割の解明を目指すことが本申請の目的である。生体内レドックス制御因子であるチオレドキシン(thioredoxin, TRX1)を中核として、その結合タンパク質thioredoxin-interacting protein(TXNIP)と低酸素誘導性因子1(hypoxia-inducible factor 1, HIF-1)との相互作用の解析を通して生体の炎症反応を敗血症から急性肺障害を経て肺線維症にまでいたる生体内機序を理解することが具体的な方策である。所期の実験計画に基づき研究初年度に以下の研究を行ったので報告する。
# 培養細胞を用いたin vitro実験の確立-細胞株(肺胞上皮由来樹立細胞株A549、ヒト末梢血単球由来THP-1細胞、ヒト単球様細胞U937、マウスマクロファージ Raw264.7)を用いてplasmid,ウイスルベクターなどを用いてHIF-1α, TRX1, TXNIPの発現を操作する実験系を構築した。培養酸素分圧を20%から1%まで変化させて検討を行う。外因性物質であるPAMPsと内因性物質であるalarminsを含むDAMPs(damage-associated molecular patterns:傷害関連分子パターン)に暴露して以下の項目について検討を可能にする実験系を確立した。○細胞内レドックスバランスの指標としてGSH/GSSG, NAD+/NADPの測定○代謝モード推定のためのOxygen consumption rate (OCR)の測定、ミトコンドリア機能のアッセイ
# 初代培養細胞(肺胞マクロファージ、腹腔マクロファージ、樹状細胞)をTRXトランスジェニック、TXNIP遺伝子破壊マウスなどから調整する準備を開始した。
# 一方動物モデルの構築には着手できなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
培養細胞を用いた実験系がほぼ予定通りに確立できた。
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| Strategy for Future Research Activity |
動物実験系の立ち上げを行い、所期の目的の達成を目指す。
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| Causes of Carryover |
動物モデルの構築に着手できずその分の研究費が次年度以降に繰り越しとなった。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
動物モデルの構築を始めて研究費を適切に使用していく予定である。
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[Journal Article] UCHL1 provides diagnostic and antimetastatic strategies due to its deubiquitinating effect on HIF-1alpha.2015
Author(s)
Goto Y, Zeng L, Yeom CJ, Zhu Y, Morinibu A, Shinomiya K, Kobayashi M, Hirota K, Itasaka S, Yoshimura M, Tanimoto K, Torii M, Sowa T, Menju T, Sonobe M, Kakeya H, Toi M, Date H, Hammond EM, Hiraoka M, Harada H.
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Journal Title
Nature communications.
Volume: 6
Pages: 6153
DOI
Peer Reviewed
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