2017 Fiscal Year Annual Research Report
Functional analysis of membrane-anchored proteins in RCC bone metastasis and development of new targeted treatment
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15K10598
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| Research Institution | University of Miyazaki |
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Principal Investigator |
向井 尚一郎 宮崎大学, 医学部, 准教授 (10315369)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
賀本 敏行 宮崎大学, 医学部, 教授 (00281098)
片岡 寛章 宮崎大学, 医学部, 教授 (10214321)
杉江 悟 宮崎大学, 医学部, その他 (50626140) [Withdrawn]
山崎 浩司 宮崎大学, 医学部, 医員 (30777355)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | HAI-2 / マトリプテース / HGF / MET |
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| Outline of Annual Research Achievements |
1．786-O細胞を用いて、腎細胞癌の骨転移マウスモデルを作製した。骨転移巣から採取した組織中のmRNAおよび蛋白を抽出し、real-time PCRで目的分子のmRNAの発現を、また免疫染色と免疫ブロットで蛋白の発現状況を確認した。その結果、骨転移巣で有意にタイプ2の膜結合型セリンプロテアーゼであるマトリプテースとHGFの発現増強がみられ、その制御因子であるHAI-2（hepatocyte growth factor activator type 2）の発現が低下していた。この現象は抽出蛋白を用いた免疫ブロットでも確認された。組織の免疫染色では骨転移組織に発現するMETのリン酸化が亢進している傾向がみられた。また親株に発現していないにもかかわらず、骨転移巣ではマトリプテース高発現していた。また比較対象として腎被膜下に移植した病巣ではマトリプテースの発現はほとんど見られず、METのリン酸化も亢進していなかった。2．786-O細胞に、レンチウィルスベクターを導入し、ドキシサイクリンで発現調節が可能なHAI-2の恒常的ノックダウン、およびHAI-2の恒常的強制発現株の2種類を作製した。3．恒常的HAI-2ノックダウン786-O細胞を用いたマトリジェル浸潤アッセイで、癌細胞の浸潤能がpro-HGF依存性に有意に亢進していた。さらに遊走能も亢進していた。要因として、マトリプテースの酵素活性によるpro-HGFの活性化亢進が寄与している可能性が考えられた。4．786-O細胞において、HAI-2ノックダウンによりマトリプテースの発現が亢進する（逆相関）現象を確認した。腎癌の骨転移巣では、リガンド依存性のMETリン酸化の亢進が、癌の進展に促進的に作用している可能性が高いと考えられた。
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[Presentation] HAI-2 regulates the invasive growth of RCC cells in bone metastasis through suppression of matriptase-induced HGF activation2017
Author(s)
Koji Yamasaki, Kozue Nakahara, Takahiro Nagai, Toyoharu Kamibeppu, Takayuki Goto, Noboru Shibasaki, Hiromasa Sakamoto, Naoki Terada, Hiromasa Tsukino, Shoichiro Mukai, Yoshinobu Toda, Toshiyuki Kamoto
Organizer
112th AUA annual meeting
Int'l Joint Research
