2016 Fiscal Year Research-status Report
セルソーティングシステムを用いた選択的な腎前駆細胞の分化と腎再生メカニズムの解明
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15K10629
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
中根 明宏 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 研究員 (70464568)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
西尾 英紀 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 助教 (10621063)
林 祐太郎 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 准教授 (40238134)
丸山 哲史 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 研究員 (50305546)
水野 健太郎 名古屋市立大学, 大学院医学研究科, 講師 (70448710)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 再生医療 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Pax2 ES細胞を用い、5% CO2、37℃で、培養液はGlasgow MEMに10% FCS、10-4M 2-メルカプトエタノール、non-essential aminoacid、1mM sodium pyruvate、1000U/ml LIF（leukemia inhibitory factor: ESGRO）を加えたもので培養する。Pax2 ES細胞をLIFを除いた培養液中でhanging drop法を用い、胚様体（EB）を形成させる。5日後にEBを再度ディッシュに付着させ、分化を進めて、10日目でEBを0.25%トリプシンEDTA溶液にて回収し、TRISol、クロロホルムにてmRNAを抽出、2-プロパノール、エタノールにて沈殿させ回収する。回収したEBはRT-PCR法でPax2遺伝子が発現していることが確認できた。また他の腎発生の各段階で発現してくる遺伝子に変化がないかどうかをRT-PCR法を用い確認したところ、aquaporin-1、Integrin a8、BMP4、BMP7、Pax8、Podocinの発現上昇が認められた。そこで、これらのEBをPax2発現細胞に対し、Pax2で標識した細胞を回収する条件でFACSを行い、細胞回収を行った。これらの細胞に対し、再度上記の遺伝子の発現が上昇しているかをRT-PCR法で確認したところ、aquaporin-1の上昇が確認できた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
FACSを行い、目的となる細胞の発現遺伝子は確認できた。他の遺伝子の発現がないかどうかの確認に時間を要している状態である。
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| Strategy for Future Research Activity |
Pax2 ES細胞をから作成したEBにおいて、Pax2発現細胞をFACSすると、回収した細胞はRT-PCR法にてaquaporin-1の上昇が確認できた。しかし、その前段階において、他の腎発生の各段階で発現してくる遺伝子のIntegrin α8、BMP4、BMP7、Pax8、Podocinの発現上昇が認められているので、これらの確認も行なっていき、FACSの精度を高めて、目的の細胞を回収する条件を選定していくことが必要な状況である。
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[Presentation] Natural history and management of perinatally detected hydronephrosis, through long-term follow up.2016
Author(s)
Akihiro Nakane, Hayashi Yutaro, Mizuno Kentaro, Nishio Hidenori, Moritoki Yoshinobu, Kamisawa Hideyuki, Kurokawa Satoshi, Maruyama Tetsuji, Yasui Takahiro
Organizer
Society for Pediatric Urology’s 64st Annual Meeting
Place of Presentation
San Diego, CA, （USA）
Year and Date
2016-05-06 – 2016-05-08
Int'l Joint Research
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