2015 Fiscal Year Research-status Report
免疫学的ハイリスク腎移植における抗CD20抗体投与後のB細胞免疫応答機構の解明
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15K10637
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| Research Institution | Akita University |
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Principal Investigator |
齋藤 満 秋田大学, 医学部, 講師 (80400505)
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2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 移植免疫 / 腎移植 / 抗体関連型拒絶反応 / BAFF / 抗CD20抗体 / 活性型B細胞 / 形質細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
まず、マウスの脾臓細胞を用いたフローサイトメトリー解析を施行した。別の実験系でも用いているCD4やFoxp3陽性のregulatory T cellなどのproportionを測定することが可能となり、methodologyが安定した。また、脾臓中のFoxp3陽性のregulatory T cellなど、免疫染色も可能となった。
今後は同種同系のC57BL/6（MHC; H-2b）、同種異系のBALB/c（MHC; H-2d）の皮膚片をそれぞれC57BL/6（MHC; H-2b）に移植（syngeneic control；非感作マウス，H-2b ⇒ H-2b、allogeneic control；感作マウス，H-2d ⇒ H-2b）し、皮膚片が約10日で拒絶されることを確認する（感作マウスの作成）。感作・非感作マウスでそれぞれ血清BAFF濃度の測定ならびに2次リンパ組織中のB細胞レパートリー数の変化をみる。ここでは感作マウスでのBAFF濃度、ならびに2次リンパ組織中のB細胞レパートリー（特に形質細胞）の細胞数の増加が起きることが予想される。
これが確認出来たら感作・非感作マウスにそれぞれ抗CD20抗体（RIT）やproteosome inhibitorを投与し、BAFF濃度の推移と2次リンパ組織中のB細胞レパートリーとの関係性を評価する。我々の仮説が正しければ、感作マウスでは2次リンパ組織中の形質細胞数が多数存在し、BAFF濃度は非感作マウスと比較して低く維持されているはずである。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
マウスの脾臓細胞を用いたフローサイトメトリーの設定（抗体の濃度やゲーティングの調整など）に予想以上に時間がかかってしまい、まだ予備実験の段階である。
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| Strategy for Future Research Activity |
予備実験として施行していたフローサイトメトリー解析や、ELISA、ウエスタンブロットなどによる血清中のサイトカイン、免疫抗原関連分子などの測定、比較が可能となった。今後は上述の通り本実験の実施に移る予定である。
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