2015 Fiscal Year Research-status Report
核周囲物質と中心体関連分子を指標とした哺乳動物精子の卵活性化能評価の開発
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15K10638
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
伊藤 千鶴 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (80347054)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
年森 清隆 千葉大学, 未来医療教育研究センター, 特任教授 (20094097)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 精子 / 卵子活性化 / エクアトリン / MN13 / ODF2 / 男性不妊症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
【１】Eqtnと卵活性化機能の関係を解析するために、以下の実験を行ってデータを得た。
１．Eqtn-/-雄マウスの卵活性化能および胚発生能を解析するために、Eqtn+/+とEqtn-/-マウスの雄をそれぞれ野性型雌マウスと交配させてplug形成後5時間後と10時間後の前核形成率と24時間後の2細胞形成率を比較して、差異があることが判った。
２．Eqtn rescue雄マウスを作製し、Eqtn-/-雄マウスおよびEqtn+/+雄マウスとの比較受精実験を行った結果、rescueマウスの胚発生率はEqtn+/+雄マウスと同程度に回復していることが判った。
３．Eqtn-/-(アクロシンEGFP(Acr-EQFP)トランスジェニック(Tg)マウスを作製して、先体反応誘起実験を行った結果、Eqtn-/-精子とEqtn+/+-Acr-EGFP精子の先体反応に差異がないことが判った。
４．Eqtn-EGFP-ODF2-2a-EGFPダブルTgマウスとAcr-EGFP-ODF2-2a-EGFPダブルTgマウスを作製した。現在、繁殖維持中であり、十分数のマウスが得られた後に受精実験を開始する予定である。
【２】ODF2と他の外側粗大線維タンパク質の関係を解析するためにODF3とODF4の遺伝子欠損マウス作製準備を開始した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成27年度の研究実施計画に沿って実験を行い、結果を得ている。ODF2-4-mCherry TgマウスとSpatc1-mChery Tgマウスはまだ完成していないが、Eqtn-/-Acr-EGFP TgマウスとEqtn-EGFP-ODF2-2a-EGFPダブルTgマウスとAcr-EGFP-ODF2-2a-EGFPダブルTgマウスの作製に成功した。Eqtn-/-雄マウスの解析も進んでおり、現在論文作成中である。
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| Strategy for Future Research Activity |
EGFP-ODF2-2a-EGFPダブルTgマウスの解析を進める。また、Acr-EGFP-ODF2-2a-EGFPダブルTgマウスも繁殖中であり、十分数のマウスが得られた後に受精実験を開始する。
ODF2と他の外側粗大線維タンパク質の関係を解析するために、CRISPR/Cas9システムを用いてODF3とODF4の遺伝子欠損マウスを作製する。マウス作製に必要なインジェクションシステムは、当教室所有の機器を使用する。
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