2015 Fiscal Year Research-status Report
低温ショック蛋白質が精巣の病態を悪化させる可能性の検討
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15K10639
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
藤田 潤 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (50173430)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 精巣 / ストレス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
哺乳類精巣は軽度低温環境下にあり、低温ショック蛋白質であるCirpとRbm3が恒常的に発現している。しかし、停留精巣ではこれらの発現が低下する。Cirpは低酸素や紫外線でも発現誘導され、抗アポトーシス活性、ストレス抵抗性を与える。しかし、Cirpが細胞外に存在すると炎症を増悪し、発癌を促進する。そこで、低温ショック蛋白質遺伝子のノックアウトマウスと野生型マウスとを比較することにより、低温ショック蛋白質が個体レベルで停留精巣等の病態を悪化させるか、あるいは防護的に働くかを明らかにすることを目的とした。
1. C57BL/6マウスに１０代以上バッククロスをかけた後、ホモのCirpノックアウトマウスを得た。マウス精巣の片側に対して実験的停留精巣手術を行い、対側をコントロールとした。３，４，６，１０日後に精巣を摘出して組織切片を作成し、HE染色を行った。その結果、３，４日後の精細管ではCirpノックアウトのほうが野生型マウスより細胞減少が著明だったが、６，１０日後では両者に差がなかった。
2. DNA損傷修復（相同組み換え）活性を検出できると報告されているレポータープラズミドDR-GFPと制限酵素I-SceIを発現するプラズミドを入手し精製した。次いで、DR-GFPプラズミドをU-2 OS細胞に導入して安定的に発現するクローンを得、I-SceIによりDNA二重鎖切断を誘導、フローサイトメトリーによりGFP発現を定量化した。I-SceIを発現させない場合に比し蛍光発現が増加しており、相同組み換えを検出することができた。
3. Cirpの発現が野生型マウスのthioacetamide誘発肝癌で増加していること、Cirpノックアウトマウスでは酸化ストレスが減少し、肝癌の発生が抑制されることが明らかになった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
当研究科の動物舎で、我々自身がヘテロ接合のマウス同士をかけ合わせ、ホモのCirpノックアウトマウスを作製しているが、十分な数のオスが生まれず実験が遅れた。そこで、一部平成２８年度実施予定の実験を行った。
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| Strategy for Future Research Activity |
ホモのノックアウトマウスが得られるように繁殖の努力を続ける。
２８年度はin vitroの実験を予定通り実施し、マウスがそろい次第in vivoの実験も行う。
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