2016 Fiscal Year Research-status Report
卵細胞質異常に起因する胚発生障害の治療法の開発に向けた基礎的検討
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15K10664
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| Research Institution | University of Yamanashi |
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Principal Investigator |
深澤 宏子 山梨大学, 総合研究部, 助教 (60362068)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
平田 修司 山梨大学, 総合研究部, 教授 (00228785)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | ミトコンドリア分布 / 紡錘体移植 / 胚発生 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
加齢卵由来の胚発生障害の主な原因は、加齢卵の細胞質の機能異常によるものと考えられているが、その「機能異常」の具体的なメカニズムについてはほとんど解明が進んでいないというのが現状である。それゆえ、加齢卵由来の胚発生障害に対する治療法として細胞質置換しか考えられていないのである。この加齢卵における細胞質の機能異常のメカニズムの解明が進めば、細胞質置換に依らない全く新しい治療法の開発に結びつく可能性がある。本研究は、加齢卵における細胞質機能異常のメカニズムをとくにMII卵細胞質内のミトコンドリア分布の制御機構に焦点を絞って解明することを目的とし、MII卵細胞質内のミトコンドリアの分布の制御に、紡錘体が重要な役割を果たしていることが確実であることから、さらにその制御メカニズムの詳細を検討する目的で本研究を計画した。
昨年度は、過排卵処理して採卵したマウスMII卵において、マイクロピペットを使用して紡錘体と細胞質体を分離する方法（MESI法）で細胞質体内のミトコンドリア分布を経時的に観察し、採卵後24時間インキュベーター内で保存したin vitro aged 卵でミトコンドリアの分布が新鮮卵に比べて変化せず、発生障害の原因としてミトコンドリア分布が寄与している可能性が示唆された。
今年度は、このミトコンドリア分布の経時的変化がhCG後どのくらい経過すると生じなくなるか、またミトコンドリア分布の経時的変化と胚発生率との関連性につき検討した。また、ミトコンドリア自体が加齢による影響を受けている可能性に関して、ミトコンドリアDNAとマトリックスの関係の視覚的観察を試みた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
ミトコンドリア分布が経時的に変化可能である細胞質を持った卵細胞の初期発生が良かったことが明らかになった。さらに、採卵後24時間経過（hCG投与後38時間経過）した卵ではミトコンドリア分布は変化しなかったが、どのくらいの時間経過でミトコンドリア分布の変化が生じなくなるか検討したところ、hCG投与後20時間前後でミトコンドリア分布の経時的変化が生じにくくなっていることが明らかとなった。ミトコンドリア分布の経時的変化が生じなかった卵細胞質にATPを直接注入し、分布変化が生じるか試みたが、ATPの不安定性のためかミトコンドリアの分布に変化は認められなかった。他にミトコンドリア分布に影響を与える可能性があると考えられる物質の注入を試みている。
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| Strategy for Future Research Activity |
ミトコンドリア分布の変化を経時的に観察し、分布が変化した卵と、変化しなかった卵でその後の初期発生率に違いがあるかを確認する。
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| Causes of Carryover |
原因は明らかではないが、一時的にマウスの排卵巣が著しく少なくなり、研究の遂行に遅れを生じた。排卵誘発の薬剤やマウスの飼育環境の変化など、原因追及に時間を要し、結果、研究の遂行が遅れたため、消耗品などの支出が少なくなり、未使用額を次年度に繰り越すこととなった。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
排卵誘発の薬剤を変更し，マウスの排卵数は戻ってきているが、時期による不安定性があるため、予定より多めのマウスを用いて、実験に必要な未受精卵数を確保する必要があり、そのために使用する予定である。
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