2015 Fiscal Year Research-status Report
ARID1A遺伝子変異を基盤とした卵巣明細胞腺癌発生機構の解明
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15K10717
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| Research Institution | Shimane University |
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Principal Investigator |
中山 健太郎 島根大学, 医学部, 准教授 (70346401)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
京 哲 島根大学, 医学部, 教授 (50272969)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 卵巣明細胞癌 / ARID１A |
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| Outline of Annual Research Achievements |
卵巣子宮内膜症性嚢胞由来上皮細胞を初代培養にて抽出し、CDK4, Cyclin D1, hTERTをレンチウイルスベクターを用いて導入し、新たに間質細胞の混入をほぼ100％防止して佐不死化細胞株HMOsisEC10の樹立に成功した。ヌードマウスへの移植実験で増腫瘍能は認めていなかった。長期培養にて細胞老化が誘導されない事を確認した。現在、Crsper cas9を用いてARID１Aの遺伝子ノックノックアウト細胞株を樹立中である。
近年、ARID1A変異型のがんは、SWI/SNF complexがARID1B発現に依存している可能性が報告された。我々はARID1A変異型卵巣明細胞癌におけるARID1Bを標的とした治療戦略について検討した。卵巣明細胞癌細胞株のうち、ARID1A 野生型 1株、ARID1A変異型 6株を用いて実験を行った。いずれの細胞株もARID1BをsiRNAでノックダウンし、細胞増殖が抑制されるかどうか検討した。60例の卵巣明細胞腺癌においてARID1A及び、ARID1Bのタンパク質発現レベルを免疫染色法で検討し、臨床病理学的因子、予後との相関について検討した。ARID1A 野生型株ではsiRNAを用いてARID1Bをノックダウンしても細胞増殖抑制効果はみられなかった。ARID1A 変異型 6株ではARID1Bをノックダウンした場合、全ての細胞株で細胞増殖が有意に抑制された。現在、Zzinc Finger Nuclease(ZFN)を用いてARID1A 野生型株においてARID1A遺伝子ノックアウトを試みており、ARID1A遺伝子ノックアウト後にARID1B依存性に変化しているかどうか検討中である。また、臨床検体ではARID1A発現陰性卵巣明細胞腺癌では全例ARID1B発現は陽性であった。ARID1B発現と臨床病理学因子、患者予後には相関は見られなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初、用いた不死化子宮内膜上皮細胞には多くの間質細胞の混入がみられたため、再度、不死化子宮内膜上皮細胞を樹立しなおした。
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| Strategy for Future Research Activity |
HMOsis EC10細胞株でCrsper cas9を用いてARID１Aの遺伝子ノックノックアウト細胞株を樹立中でるが、シングルクローンを作成するところで実験が難航している。
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| Causes of Carryover |
ARID1Aの遺伝子ノックアウトの必要経費が多額となっため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
ARI1A遺伝子ノックアウトにCrsper cas 9を用い、計画中。
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[Journal Article] Prognostic role and implications of mutation status of tumor suppressor gene ARID1A in cancer: a systematic review and meta-analysis.2015
Author(s)
Luchini C, Veronese N, Solmi M, Cho H, Kim JH, Chou A, Gill AJ, Faraj SF, Chaux A, Netto GJ, Nakayama K, Kyo S, Lee SY, Kim DW, Yousef GM, Scorilas A, Nelson GS, Köbel M, Kalloger SE, Schaeffer DF, Yan HB, Liu F, Yokoyama Y, Zhang X, Pang D, Lichner Z, Sergi G, Manzato E, Capelli P, Wood LD, Scarpa A, Correll CU.
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Journal Title
Oncotarget
Volume: 36
Pages: 39088-39097
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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