卵巣明細胞腺癌の早期診断マーカーとしての血清中miRNAの探索と解析

2016 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K10733
• Research Institution: Tokyo Medical University
• Principal Investigator: 西 洋孝 東京医科大学, 医学部, 講師 (60307345)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 岡本 愛光 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (20204026)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: miRNA / 卵巣癌 / 明細胞線癌 / 腫瘍マーカー

Outline of Annual Research Achievements

microRNA（miRNA）の発現パターンは、がんを含む種々の疾患においてダイナミックに変化するが、診断・治療に関するバイオマーカーとしても有望視されている。本研究では、有用な腫瘍マーカーの存在しない卵巣明細胞線癌の早期診断を可能とするような血清中miRNAの探索・同定を行う。卵巣明細胞腺癌患者における循環血液中のmiRNAを網羅的に解析し、発現量の大きく変化しているmiRNA（miR-146a、miR-191、miR-484およびmiR-574-3p）を同定した。これらと進行期・予後・治療に対する奏効性および組織型などとの相関性を調べ、末梢循環miRNAの臨床的意義を探る。
次に、これらmiRNAの候補標的遺伝子をin silico解析により検索する。3’-UTRを含む候補標的遺伝子配列をルシフェラーゼコンストラクトに組み込み、卵巣明細胞腺癌細胞株を用いてmiRNA強制発現系でルシフェラーゼアッセイを行い、ルシフェラーゼ活性を調べる。また、変異を挿入した候補標的遺伝子配列を組み込んだルシフェラーゼコンストラクトを作製し、mルシフェラーゼアッセイを行う。そして、miRNA強制発現系における候補標的遺伝子の発現をrealtime RT-PCR法およびwestern blot法にて確認する。miRNAとその候補標的遺伝子の機能解析を行い、卵巣明細胞腺癌におけるmiRNAの発現の意義を検討することによりテーラーメード医療等新規治療法の開発の端緒としたい。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

予定より卵巣明細胞腺癌の症例数が少なく、検体採取数がやや遅れている。また、レーザースキャニングマイクロダイゼクション（LSM）法による癌細胞のみの選別とそこからのtotal RNA の抽出を行っているが、LSM用の機器準備に時間を要したため。

Strategy for Future Research Activity

卵巣明細胞腺癌の検体採取をもれなく効率よく行う。また、レーザースキャニングマイクロダイゼクション（LSM）法による癌細胞の選別とtotal RNA の抽出作業を滞りなく行う。

Causes of Carryover

予定より卵巣明細胞腺癌の症例数が少なく検体採取に遅れを生じ、核酸抽出等の試薬等の使用頻度が少なかったため、また、レーザースキャニングマイクロダイゼクション（LSM）法による癌細胞のみの選別とそこからのtotal RNA の抽出作業にも遅れが生じたため、消耗品等の費用が予定より少なくなった。

Expenditure Plan for Carryover Budget

次年度に遅れている作業を効率よく速やかに行うため、今年度の繰り越し額分も消費する予定である。