2016 Fiscal Year Research-status Report
内耳におけるミトコンドリア機能の定量的評価法の確立
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15K10743
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
藤本 千里 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (60581882)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 内耳 / ミトコンドリア |
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| Outline of Annual Research Achievements |
内耳障害発生のメカニズムにはミトコンドリアの機能障害が深く関わると考えられており、この説は、ミトコンドリア遺伝子異常に起因する疾患の多くが難聴を合併する臨床的背景や、実験動物による基礎研究などにより支持されている。一方、ミトコンドリア機能解析は、様々な研究分野において行われているが、内耳におけるミトコンドリア機能評価については、十分に確立しているとはいい難い。本研究は、内耳におけるミトコンドリア機能のリアルタイム定量評価法を確立することを目的としている。
我々は、不死化内耳培養細胞HEI-OC1、および、マウスコルチ器の器官培養に、ATP阻害剤（オリゴマイシン）、脱共役剤（FCCP, カルボニルシアニド-p-トリフルオロメトキシフェニルヒドラゾン）、ミトコンドリア複合体III阻害剤（アンチマイシンA）、ミトコンドリア複合体I阻害剤（ロテノン）を投与し、酸素消費速度の変動を細胞外フラックスアナライザーを用いて計測する実験系を確立する研究を行っている。これまでの成果として、HEI-OC1、および、マウスコルチ器器官培養ともに、オリゴマイシン添加による酸素消費速度の低下、FCCP添加による酸素消費速度の上昇、アンチマイシンA・ロテノン添加による酸素消費速度の低下、がそれぞれ確認できた。また、HEI-OC1の系を用い、H2O2暴露による酸化ストレスモデルで呼吸代謝が落ち、薬剤性ストレスにも易障害性が増すことを証明した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
内耳におけるミトコンドリア機能のリアルタイム定量評価法として、不死化内耳培養細胞、マウスコルチ器の器官培養系において、酸素消費速度の変動を細胞外フラックスアナライザーを用いて計測することができた。また、不死化内耳培養細胞の系を用いて、H2O2暴露による内耳酸化ストレスモデルに関し、新知見を得ることができた。
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| Strategy for Future Research Activity |
正常マウスのコルチ器の培養系において、好気呼吸のプロファイリングが可能となったが、現時点で、基礎呼吸に個体間のばらつきが見られている。細胞外フラックスアナライザーは、もとは細胞ベースの代謝研究用に設計されているものであるが、本研究ではマウスコルチ器の培養系に応用し、呼吸パラメータのプロファイリングを行っているため、均一な細胞集団での測定が行えていないという、手技的な問題が生じている可能性がある。ばらつきが少なくなるような実験手法や解析手法の検討を今後行っていく予定としている。また、本実験系を用いて、遺伝子改変マウスや内耳障害モデルマウスによるコルチ器全体のミトコンドリア機能の評価を行う予定としている。
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| Causes of Carryover |
消耗品費への出費が、想定していた額よりも少なかったため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
消耗品費として、培養用試薬、ミトコンドリア機能解析用試薬、実験用動物・飼育費、その他の分子生物学用試薬に使用する。また旅費として、国内学会発表と国際学会発表を予定しているため、各々に対して使用する。
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Research Products
(18 results)
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[Journal Article] Denervation of nasal mucosa induced by posterior nasal neurectomy suppresses nasal secretion, not hypersensitivity, in an allergic rhinitis rat model2016
Author(s)
Nishijima H, Kondo K, Toma-Hirano M, Iwasaki S, Kikuta S, Fujimoto C, Ueha R, Kagoya R, Yamasoba T
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Journal Title
Lab Invest
Volume: 96
Pages: 981-993
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Association of the upregulated expression of focal adhesion kinase with poor prognosis and tumor dissemination in hypopharyngeal cancer.2016
Author(s)
Omura G, Ando M, Saito Y, Kobayashi K, Yoshida M, Ebihara Y, Kanaya K, Fujimoto C, Sakamoto T, Kondo K, Asakage T, Yamasoba T
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Journal Title
Head Neck
Volume: 38
Pages: 1164-1169
DOI
Peer Reviewed
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