2015 Fiscal Year Research-status Report
新しいRNA干渉法を用いた内耳感覚上皮の発現遺伝子の検討
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15K10753
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
菅原 一真 山口大学, 医学部附属病院, 講師 (20346555)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
山下 裕司 山口大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (00210419)
原 浩貴 山口大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (90274167)
廣瀬 敬信 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (80555714)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 内耳感覚細胞障害 / 卵形嚢培養 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
内耳感覚細胞が障害される際，細胞内シグナル伝達に関わる分子群の活性化が誘導され，その後に感覚細胞が死滅する。哺乳動物の感覚細胞はひとたび障害されると再生されることはなく，現在の難聴治療上の障壁となっている。申請者は，これまで内耳感覚細死のメカニズムを明らかにするべく基礎的研究を行ってきた。本研究では，これらの感覚細胞死を抑制する方法として，HSP70に代表される熱ショック蛋白質に注目している。熱ショック蛋白質は細胞死のシグナルの各段階において細胞死を抑制する作用がある。本研究ではRNA干渉といった新しい手法を用いて，内耳感覚細胞死のメカニズムを明らかにすることを予定した。実験材料としては，培養卵形嚢を使用した。卵形嚢を培養するためには，顕微鏡下，清潔操作にてマウス側頭骨より卵形嚢を挫滅させずに摘出する技術が必要となる。この方法は過去に報告した方法に準じて，施設内で行った。さらに培養卵形嚢内の内耳感覚障害の程度を評価するためには，以前より行っている免疫組織化学を用いて有毛細胞を標識する方法を用いた。本年度はRNAを細胞内に導入するための至適条件を求めるために培養実験を行った。ある程度の導入は認められ，条件が確定すれば，熱ショック蛋白質の発現を抑制するRNAを用いた実験に進む予定であったが，結果が安定するまでに時間を要した。実際に熱ショック蛋白質を抑制する実験は次年度に行う予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度はRNAを細胞内に導入するための至適条件を求めるために培養実験を行った。ある程度の導入は認められ，条件が確定すれば，熱ショック蛋白質の発現を抑制するRNAを用いた実験に進む予定であったが，結果が安定するまでに時間を要した。実際に熱ショック蛋白質を抑制する実験は次年度に行う予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
今回設定した実験条件を用いて，熱ショック蛋白質の感覚細胞障害における役割を検討する予定である。具体的には培養卵形嚢の感覚細胞にRNAを導入することでこれらの蛋白質の発現を抑制し，細胞障害に与える影響を観察する。実験が成功すれば，感覚細胞障害に関係している他の分子についても実験を拡大して行う予定である。
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| Causes of Carryover |
実験動物より摘出した卵形嚢を培養する実験を中心に計画していたが，培養条件が整わないことから，条件設定に時間を要した。そのため予定していた実験動物の使用数が減少した。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度より条件が整い実験を遂行する予定であり，実験動物の購入費，飼育管理費として使用する予定である。
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