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2016 Fiscal Year Research-status Report

ROS制御による頭頸部癌の化学放射線耐性の克服

Research Project

Project/Area Number 15K10805
Research InstitutionUniversity of Fukui

Principal Investigator

成田 憲彦  福井大学, 学術研究院医学系部門, 准教授 (80345678)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 高林 哲司  福井大学, 学術研究院医学系部門(附属病院部), 講師 (70397272)
Project Period (FY) 2015-04-01 – 2018-03-31
Keywords頭頚部癌 / SESN1 / ROS / シスプラチン耐性 / 放射線耐性 / 温熱耐性
Outline of Annual Research Achievements

我々は頭頸部癌におけるシスプラチン耐性機構を解析するために、頭頸部癌(上顎癌)細胞株IMC3からシスプラチン高度耐性株IMC3CRを樹立した。PCR arrayの結果から、IMC3CRにシスプラチンを添加した際に、Sestrin 1(SESN1)の発現が2倍以上に増加する事を見出した。SESN1はミトコンドリアからのROS産生を抑制することが報告されている。ROSはシスプラチンを含む様々な抗腫瘍薬、放射線、また温熱刺激などで産生され、チトクロームc、カスパーゼを介したアポトーシスを誘導する。このことからSESN1が頭頸部癌の抗腫瘍薬耐性、放射線耐性および温熱耐性に共通して関与する可能性があると考えた。
IMC3CRにシスプラチンを添加し、6時間後にReal-time PCRを行うとIMC3(野生株)に比べ、SESN1の発現が約30倍増加することが解った。またウェスタンブロット法でもシスプラチン刺激3~6時間でSESN1が著明に誘導されることを確認した。SESN1の機能解析のためRNAiによりSESN1を抑制し、MTT assayを行った。その結果、SESN1を抑制することで、シスプラチン処理後48時間のIMC3CRの細胞生存率は約60%著明に減少することが解った。コロニー法で長期細胞生存率を解析すると、SESN1抑制によってシスプラチン投与後の細胞生存率はさらに低下し、シスプラチン耐性が大幅に減弱されることが判明した。フローサイトメトリー、ROS測定によりSESN1抑制による細胞生存率低下がROS誘導型アポトーシスの増加によることを証明した。またMTTアッセイによりIMC3CRは温熱耐性をも獲得していることが示された。SESN1を抑制すると、この温熱耐性が減弱され、アポトーシスが増加することがフローサイトメトリー、MTTアッセイ、コロニー法で証明された。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

計画当初はプラチナ耐性および放射線耐性との関連を予想していたが、実験経過によりプラチナ耐性と温熱耐性に方向性を転換した。本研究の成果を論文として作成中である。内容を補完するデータのための追加実験を行っている段階であり、おおむね順調に進展している。

Strategy for Future Research Activity

現時点で論文本体はほぼ完成している。内容を補完するための実験を若干要する状態である。これらが完成後、論文を投稿する。

Causes of Carryover

PCRアレイ、リアルタイムPCR、フローサイトメトリー等の基礎実験が予想より効率的に結果が得られたため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

論文完成に必要となるウェスタンブロット、免疫染色、試薬、抗体で使用予定である。

  • Research Products

    (1 results)

All 2016

All Presentation (1 results)

  • [Presentation] CDKN3抑制は頭頸部癌細胞株におけるタキサン耐性を減弱する2016

    • Author(s)
      成田憲彦
    • Organizer
      第40回日本頭頸部癌学会
    • Place of Presentation
      ソニックシティ(埼玉県さいたま市)
    • Year and Date
      2016-06-09 – 2016-06-10

URL: 

Published: 2018-01-16  

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