2015 Fiscal Year Research-status Report
眼炎症疾患に対するNF-κB 分子特異的眼局所療法の開発
| Project/Area Number |
15K10901
|
|---|
| Research Institution | Kyorin University |
|---|
Principal Investigator |
岡田 アナベル・あやめ 杏林大学, 医学部, 教授 (50303962)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
|
| Keywords | 眼炎症 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では炎症の進展において重要な分子標的の一つと考えられるnuclear factor-kappa B(NF-kB)に注目し、難治性眼炎症疾患に対するNF-kB 分子特異的な眼局所療法の開発を目的として、1) 難治性ぶどう膜網膜炎の動物モデルである実験的自己免疫性ぶどう膜網膜炎(EAU)に対する新規低分子NF-kB 阻害剤である DHMEQ (dehydroxymethyl-epoxyquinomicin)の眼局所(硝子体内)投与の有効性の検討、2) DHMEQ による網膜色素上皮細胞(RPE)への抗炎症効果の検討を行った。
1)についてはEAUを誘導したラットの硝子体内にDHMEQを投与し、EAUの臨床スコアの変動を評価した。実験群としてA:EAU誘導+基剤投与群、B:EAU誘導+DHMEQ投与群の2群を作成し、免疫後10日目に硝子体内投与を施行、投与後は2日おきに細隙灯顕微鏡を用いて前眼部の炎症所見をスコア化 (EAUスコア)し、DHMEQの有効性を検討した。免疫後10日目から両群においてEAUの発症がみられ、免疫後14日目までEAUの進行が観察され、16日目以降EAUは軽快した。免疫後12、14、16日目でEAUスコアを比較したところ両群間に有意差は認められなかった。平成28年度はDHMEQの硝子体内投与量、投与時期を変更し、EAUに対する炎症抑制効果がみられるか検討を行う。
2)については、これまでの報告でRPEをTNF-aの存在下で培養すると炎症関連分子として知られるICAM-1の発現が上昇することが知られている。平成27年度はヒトRPE細胞株であるARPE-19におけるICAM-1に対するDHMEQ の発現抑制効果を検討したところ、濃度依存的に有意に抑制されることを確認した。平成28 年度はDHMEQの作用機序を検討するためARPE-19におけるNF-kB 分子の核内移行の阻害効果を免疫染色法にて確認する予定である。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成27年度の実験計画では、1)難治性ぶどう膜網膜炎の動物モデルである実験的自己免疫性ぶどう膜網膜炎(EAU)を用いてNF-kB 阻害剤 DHMEQの眼局所(硝子体内)投与の有効性の検討、2)DHMEQ投与眼における炎症性関連分子の発現変動の検討、3) DHMEQ による網膜色素上皮細胞細胞株のICAM-1 発現の抑制効果の検討、4) DHMEQによる網膜色素上皮細胞細胞株におけるNF-kB 分子の核内移行の阻害効果の検討の4点を予定した。
1) についてはEAU誘導+基剤投与群、EAU誘導+DHMEQ投与群の2群を作成し、免疫後10日目に硝子体内投与を施行、投与後は前眼部の炎症所見をスコア化し、DHMEQの有効性を検討した。その結果、免疫後12、14、16日目においてEAUスコアを比較したところ両群間に有意差は認められなかった。2)については1)での実験でDHMEQによるEAU抑制効果がみられなかったため、作用機序解析のための眼内組織中炎症関連分子の発現変動を確認するに至らなかった。今回の結果を踏まえ、平成28年度ではDHMEQの硝子体内投与量、投与時期を変更し、EAUに対する炎症抑制効果がみられるかさらに検討を行う。3)についてはヒトRPE培養細胞株であるARPE-19におけるICAM-1に対するDHMEQ の発現抑制効果を検討したところ、濃度依存的にICAM-1の発現が有意に抑制されることを確認した。4)についてはNF-kB 分子の核内移行の阻害効果を免疫組織染色法を用いて検討を予定していたが、1)、2)の実験に時間を要したため施行できなかった。以上の結果より今年度予定していた実験の7割程度達成できたと考える。
|
| Strategy for Future Research Activity |
平成28年度の実験計画では、1) DHMEQの硝子体内投与によるエンドトキシン誘導実験的ぶどう膜炎(EIU)の抑制効果の検討、2)実験的自己免疫性ぶどう膜炎(EAU)を用いたDHMEQの硝子体内投与によるEAUの抑制効果の検討、3) DHMEQ による網膜色素上皮細胞細胞株のケモカインの抑制効果の検討、4) DHMEQによる網膜色素上皮細胞細胞株におけるNF-kB 分子の核内移行の阻害効果の検討の4点を施行予定である。
1) についてぶどう膜炎の代表的な動物モデルであるEIUをリポポリサッカロイド(LPS)を用いて誘導し、DHMEQ を硝子体内に投与して前房水中の炎症性細胞の浸潤、蛋白濃度、サイトカイン、ケモカインの発現量を検討することでDHMEQの眼局所における炎症抑制効果について検討を行う。
2)については今年度の実験にて免疫後10日目に DHMEQを硝子体内に投与したところ基剤投与群に比較してEAUスコアの有意な差は認められなかった。平成28年度ではDHMEQの硝子体内投与量、投与時期を変更し、EAUに対する炎症抑制効果がみられるかさらに検討を行う。
3)、4)については平成27年度の実験においてヒトRPE培養細胞株であるARPE-19におけるICAM-1に対するDHMEQ の発現抑制効果が確認されている。そこでDHMEQ による網膜色素上皮細胞細胞株からのケモカインの産生抑制効果についてELISA法と定量PCRを用いて検討を行う。またNF-kB 分子の核内移行の阻害効果は免疫組織染色にて検討する。
|
| Causes of Carryover |
平成27年度の実験計画では、1)難治性ぶどう膜網膜炎の動物モデルである実験的自己免疫性ぶどう膜網膜炎(EAU)を用いてNF-kB 阻害剤 DHMEQの眼局所(硝子体内)投与の有効性の検討、2)DHMEQ投与眼における炎症性関連分子の発現変動の検討、3) DHMEQ による網膜色素上皮細胞細胞株のICAM-1 発現の抑制効果の検討、4) DHMEQによる網膜色素上皮細胞細胞株におけるNF-kB 分子の核内移行の阻害効果の検討の4点を予定した。特に1)のDHMEQの硝子体内投与によるEAUの抑制効果の確認に時間を要したため4)の実験を実施できなかった。またDHMEQによるEAUの抑制効果が観察されなかったため2)の実験を施行できなかった。以上の結果より当初予定していた使用額に至らなかった。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
平成28年度の実験計画では、1) DHMEQの硝子体内投与によるEIUの抑制効果の検討、2) DHMEQの硝子体内投与によるEAUの抑制効果の検討、3) DHMEQ による網膜色素上皮細胞細胞株のケモカインの抑制効果の検討、4) DHMEQによるNF-kB 分子の核内移行の阻害効果の検討を予定している。
1)ではLPSを皮下投与する直前にDHMEQを硝子体内投与(DHMEQ群)、対照としてDHMEQの基剤を投与（基剤群）、LPS投与24時間後に前房水と虹彩を採取、前房水中の蛋白濃度・細胞数を測定、IL-1・IL-6をELISA法にて測定し、両群間で比較検討を行う。2)ではDHMEQの投与条件の検討を行い、炎症抑制効果を再度評価する。3)はDHMEQ による網膜色素上皮細胞細胞株からのケモカインの産生抑制効果についてELISA法、定量PCRの両方で検討、4)は免疫組織染色にて評価する。
|
Research Products
(10 results)
-
[Journal Article] Dehydroxymethylepoxyquinomicin, a novel nuclear factor-κB inhibitor, reduces chemokines and adhesion molecule expression induced by IL-1β in human corneal fibroblasts.2015
Author(s)
Inokawa S, Watanabe T, Keino H, Sato Y, Hirakata A, Okada AA, Fukuda K, Fukushima A, Umezawa K.
-
Journal Title
Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol.
Volume: 253
Pages: 557-563.
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
-
-
-
-
-
-
-
-
-
