2018 Fiscal Year Annual Research Report
Identification of ECM proteins that inhibit calcification in bone and dentin using matrix-assisted laser desorption/ionization imaging mass spectrometry
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15K11003
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
笹野 泰之 東北大学, 歯学研究科, 教授 (30196191)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中村 恵 東北大学, 歯学研究科, 助教 (20431512)
逸見 晶子 東北大学, 歯学研究科, 大学院非常勤講師 (40613055)
鈴木 治 東北大学, 歯学研究科, 教授 (60374948)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 石灰化 / 歯胚 / 質量顕微鏡 / 基質 / 細胞 / 脂質 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、骨や象牙質等の硬組織を研究対象とし、特徴的な基質分子について、質量顕微鏡法を用いて解析することを目的とした。質量分析イメージング法（質量顕微鏡法）の硬組織への適用は国内外で研究報告が乏しいことから、試料作製について方法論を確立するため、生後３日齢Wistar系ラットの上下顎を以下①②③の方法で凍結包埋し、質量顕微鏡で比較検討した。①未固定・非脱灰・凍結包埋 ②4%パラホルムアルデヒド固定・非脱灰・凍結包埋 ③4%パラホルムアルデヒド固定・10%EDTA脱灰・凍結包埋。切片の組織学的観察および質量顕微鏡による予備的検討の結果、組織形態の保持、シグナルの検出状態等の観点から、②と③が質量顕微鏡用に相応しい試料作製方法と判断されたことから、これらの方法で試料を作製することとした。臼歯歯胚を中心とした関心領域のマススペクトルでは、質量電荷比m/z 706, 732および734にピークを示す分子が認められた。この内、m/z 706および732のシグナルは歯胚における歯乳頭、エナメル上皮等に局在し、これらの分子はデータベース検索から特定のphosphatidylcholinesと推定された。なお、質量顕微鏡から得られた歯胚における脂質の局在を異なるアプローチとして組織化学的に確認することを目的とし、ラット歯胚における脂質分子の分布をSudan Black B 染色で検討した。胎生１８日齢のラットの頭部を上記②③の方法で凍結包埋試料とした。凍結切片を作製し、Sudan Black B 染色を施した。②と③の両方の試料で、歯乳頭、エナメル上皮等に染色性が認められた。これらの研究の成果は、「質量分析イメージングにおける硬組織試料作製法の検討と歯胚に局在する脂質分子の探索」と題して、第60回歯科基礎医学会学術大会（２０１８年９月５日-７日、福岡市）にて発表した。
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