2015 Fiscal Year Research-status Report
Cre-loxPシステムを利用したGABA・セロトニンの味蕾における機能解析
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15K11018
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| Research Institution | Kyushu Dental College |
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Principal Investigator |
瀬田 祐司 九州歯科大学, 歯学部, 教授 (90291616)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
豊野 孝 九州歯科大学, 歯学部, 講師 (10311929)
中富 満城 九州歯科大学, 歯学部, 講師 (10571771)
小野 堅太郎 九州歯科大学, 歯学部, 准教授 (40316154)
片岡 真司 九州歯科大学, 歯学部, 助教 (80364149)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 転写因子 / 味蕾 / マウス / Mash1 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では①味蕾におけるMash1の機能の解明、②味蕾におけるセロトニンとGABAの機能の解明、③味蕾細胞の分化に関係する転写因子の探索を目的として、研究を行った。
１．成体マウス味蕾におけるMash1発現細胞の細胞系譜を検索：Mash1-CreERT2マウスとCAG-floxed Neo-EGFPマウスを交配させ、Mash1-CreERT2/ CAG-floxed Neo-EGFPマウスを作製し、タモキシフェンを投与することで、味蕾におけるMash1発現細胞にGFPを発現させ、味蕾の各細胞型のマーカーとの局在を検索した。その結果、味蕾におけるGFP発現細胞は味蕾の３型細胞のマーカーと局在が一致していたが、２型細胞のマーカーとは一致していなかった。
２．成体マウス味蕾におけるMash1の機能解析：Mash1-CreERT2マウスとCAG-floxed Neo-DTAマウスを交配させ、Mash1-CreERT2/ CAG-floxed Neo-DTAマウスを作製し、タモキシフェンを投与することで、味蕾におけるMash1発現細胞を変性させることを試みた。タモキシフェン投与３日から１０日までの味蕾を味蕾細胞のマーカーで検索したところ、投与日数が多くなると３型細胞の数が減少していることが確認された。しかしながら、２型細胞の数には変化が認められなかった。
以上の結果から、味蕾におけるMash1は３型細胞の分化に関与していることが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
初年度の研究計画をおおむね遂行することができた。タモキシフェン投与によるマウスの死亡が多く、機能実験にまで進むことができなかったが、投与法を改良して生存率の向上ができるように検討中である。
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| Strategy for Future Research Activity |
１．味蕾のおけるセロトニン・GABA受容体の発現の検索
①セロトニン受容体・GABA受容体のサブタイプの発現をRT-PCR法で検索する。②①において味蕾で発現が認められたセロトニン・GABA受容体の味蕾における局在をin situ Hybridization、免疫染色を用いて検索する。特に発現が認められた受容体が、味蕾のどの細胞型に発現しているのかを各細胞型のマーカー（gustducin, PGP9.5, NCAM, serotoninなど）との2重染色により確認する。
２．味蕾におけるセロトニン・GABAの機能検索
①Mash1-CreERT2/ CAG-floxed Neo-DTAマウスにタモキシフェンを投与して、味蕾におけるセロトニン産生細胞とGABA産生細胞を変性させる。②２ボトルテストで①のマウスが各味覚に対する感受性の変化が生じているかどうかを検索する。③①のマウスと野生型マウスの舌に味物質（酸味・塩味・甘味・うま味・苦味）で刺激して、舌咽神経ならびに鼓索神経の応答の変化を比較する。
３．Ⅲ型細胞の分化におけるMash1の機能検索
①マウスの有郭乳頭上皮と味蕾を含まない舌上皮、さらにタモキシフェン投与Mash1-CreERT2/ CAG-floxed Neo-DTAマウスからそれぞれmRNAを抽出し、PCR-array法で神経細胞の分化関連する転写因子の発現のプロファイルを作製する。②作製したプロファイルを解析ソフトウェアにより詳細に解析する。有郭乳頭上皮において発現頻度の高い転写因子の抽出（特にbHLH型ならびにホメオボックス型）をおこなう。
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