2016 Fiscal Year Research-status Report
自家ラット臼歯歯髄幹細胞を用いた歯髄組織再生法の確立
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15K11110
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
金子 友厚 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 助教 (70345297)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 歯髄再生 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、同一ラットの下顎第一臼歯より単離・培養した幹細胞を、速やかに培養増殖させるための方法を検索し、これらの細胞をPLLAスキャホールドと組み合わせて、生活歯髄切断法を行ったラット上顎第一臼歯へ移植し歯冠部歯髄を組織工学的手法により再生させることを目的とした。ラット下顎臼歯を抜歯後、歯冠歯髄より歯髄細胞を分散・分離し、pericyteマーカーであるCD146抗体、あるいはMAP1-B抗体と反応させ、CD146+MAP1B+ラット臼歯歯髄幹細胞およびCD146+MAP1B-血管内皮細胞を単離、培養した。さらにこれら血管内皮細胞に対してVEGFを添加し培養・増殖させ、この血管内皮細胞と幹細胞をPLLA/ペプチドハイドロゲル混合型3次元スキャホールドとともにラット臼歯に移植し、観察期間を3、7、14日間として、歯髄再生が誘導可能かどうかを検証している。
おもな研究成果 歯科の著名な国際誌に３本の論文がアクセプトされた。
1. Ito T, Kaneko T, et al. Dental pulp tissue engineering of pulpotomized rat molars with bone marrow mesenchymal stem cells. Odontology. 2. Sueyama Y, Kaneko T, et al. Effect of lipopolysaccharide stimulation on stem cell-associated marker-expressing cells. International Endodontic Journal. 3. Sueyama Y, Kaneko T,et al. Implantation of endothelial cells with mesenchymal stem cells accelerates dental pulp tissue regeneration/healing in pulpotomized rat molars Journal of Endodontics.
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
新潟大学から東京医科歯科大学へ移動したため、研究室の整備に多少の時間を費やしたが、研究は順調に実施され、研究結果は３本の論文が国際誌にアクセプトされた。
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| Strategy for Future Research Activity |
1. 炎症歯髄より採取した幹細胞の炎症上顎臼歯への移植実験を行う。
実際の臨床においては、炎症を生じた歯髄より幹細胞を採取し、その細胞を当該歯へ移植することが想定される。そこで本実験においては、炎症を生じさせた下顎臼歯より幹細胞を採取後、あらかじめ歯髄炎を生じさせた上顎臼歯へ移植し、歯髄組織が再生可能かを検索する。a.LPSにより炎症をおこさせた下顎第一臼歯を抜歯後、実験1、２と同様の手法によりラット下顎臼歯歯髄幹細胞（CD146+MAP1B+細胞あるいはCD146+STRO1+細胞）を採取し、3～7日間培養・増殖させる。b.ラウンドバーを用いて上顎および下顎臼歯を点状露髄後、LPSを貼薬し、それぞれの歯に実験的歯髄炎を生じさせる。c.幹細胞添加三次元スキャホールドを実験５aの上顎炎症歯髄へ、１～２週間埋入する。d.再生した組織の評価：実験2と同様に、再生した歯髄組織を組織学的、免疫組織化学染色学的、分子生物学的に検索する。
2. 自家幹細胞と自家血管内皮細胞を用いたラット上顎歯髄組織の再生を実施するa.実験１と同様の手法を用いてラット下顎臼歯歯髄幹細胞（CD146+MAP1B+細胞）およびラット下顎臼歯血管内皮細胞（CD146+MAP1B-細胞あるいはCD146+STRO1+細胞）を採取する。これらの細胞を細胞増殖効率が優れていた培養液および培養条件を使用し、2～3日間培養し、増殖させる。b.幹細胞・血管内皮細胞添加PLLA/ペプチドハイドロゲル混合型三次元スキャホールドの作成：実験2と同様の手法を用い、ゲル状の三次元スキャホールドを作成する。c.上顎臼歯への幹細胞・血管内皮細胞添加三次元スキャホールドの埋入：実験2と同様に三次元スキャホールドを、１～２週間埋入する。d.再生した組織の評価：実験2と同様に、再生した歯髄組織を組織学的、免疫組織化学染色学的、分子生物学的に検索する。
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| Causes of Carryover |
注文した抗体が、国内在庫がなく、年度内に納品できなかったため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
研究計画に沿って、計画的に助成金を使用し、研究を滞りなく実施する。
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