軟骨再生医療を視野に入れたCTGF/CCN2発現促進機構の解析

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K11247
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 森谷 徳文 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (60467751)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 青山 絵理子 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (10432650) ; 滝川 正春 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (20112063) ; 西田 崇 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (30322233) ; 松村 達志 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 講師 (70432648) ; 久保田 聡 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (90221936)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 軟骨再生

Outline of Annual Research Achievements

これまでの研究でDexamethasoneを軟骨細胞様細胞株であるHCS-2/8細胞に作用させるとCTGF/CCN2がup-regulateされることはすでに明らかにしている．CTGF/CCN2遺伝子の発現を調節する遺伝子を検索したところCEBPBおよびCEBPD遺伝子が候補として挙げられたため，まずはこれら2遺伝子がDexamethasone によりup-regulateされることをreal-time PCR法にて明らかとした．続いてCEBPB，CEBPD遺伝子をHCS-2/8細胞にtransfectionして強制発現させCTGF/CCN2遺伝子の発現調節を確認したところCTGF/CCN2遺伝子発現の促進を示唆する結果が得られた．またHCS-2/8細胞においてCEBPB，CEBPDの遺伝子発現をRNAiにより抑制したところCTGF/CCN2遺伝子発現の抑制を示唆する結果が得られた．これをタンパク質レベルで確認するため，まずCEBPB，CEBPD遺伝子をHCS-2/8細胞にtransfectionして強制発現させCTGF/CCN2タンパク質の発現調節をWestern Blot法にて確認したところCTGF/CCN2タンパク質発現の促進を示唆する結果が得られた．これによりCEBPB，CEBPDがCTGF/CCN2を直接コントロールしている可能性が示唆された．
一方でCTGF/CCN2の発現をコントロールしている他の因子を検索したところ17個の遺伝子が候補として挙げられた．

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

おおむね計画通りに研究が進んだため

Strategy for Future Research Activity

1) CTGF/CCN2の発現をコントロールしていると考えられるCEBPB, CEBPD以外の因子を同定し，これらをCEBPB, CEBPDを含めNCRF(New CTGF/CCN2 related factor)と定義する．
2) HCS-2/8細胞内でのNCRF発現の局在を確認する．
3) Dex刺激に伴うNCRFのタンパク質発現・分布のHCS-2/8細胞における変化をWestern blot法あるいはELISA法を用いて確認する．
4) NCRFの軟骨細胞分化における役割をin vitroで機能解析する．
5) NCRFを介してCTGF/CCN2を特異的に誘導する分子を探索する．
6) 各種OAモデルラットを用いてNCRFまたは5)で見出された分子が軟骨再生機能を有するか否かを検証する．

Causes of Carryover

実験に使用する一部の消耗品が十分量あり，追加購入の必要性が生じなかったため．

Expenditure Plan for Carryover Budget

次年度に持ち越した予算は，国内での資料収集等に使用する計画である．