2016 Fiscal Year Research-status Report
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15K11273
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| Research Institution | Nihon University |
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Principal Investigator |
北野 尚孝 日本大学, 医学部, 助教 (50424726)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 癌 / 遺伝子治療 / ゲノム |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成27年度の研究において、ヌードマウス移植腫瘍のE3C1による腫瘍縮小は腫瘍血管の変化によるものであることが明らかとなった。平成28年度の研究では、平成27年度に行った研究と同様に引き続き、マウス移植腫瘍に対するE3C1遺伝子による遺伝子治療を行い、E3C1が腫瘍内の血管新生に与える影響について研究した。まず、ヌードマウス背部皮下に扁平上皮癌細胞株(A431細胞)を移植した。移植腫瘍のサイズが50mm3に達した移植腫瘍に対してpE3C1を用いて1週に1回の遺伝子治療を3週間に渡って行った。3回目の遺伝子治療が終了した翌週に、マウスの尾静脈より腫瘍血管内にlycopetsicon esculentum lectin（トマトレクチン）を注射した。その後、頚椎脱臼法にて安楽死したマウスより腫瘍を一塊に摘出し、凍結切片を作成した。作製された標本を抗PECAM抗体、抗αSMA抗体、抗von Willebrand因子抗体および抗PDGFβ抗体を用いて免疫組織化学染色し微視的観察を行った。その結果、マウス移植腫瘍に対するE3C1遺伝子による遺伝子治療を行うと腫瘍血管は内皮細胞が存在しながら、トマトレクチンにより示される血流が欠落することが明らかとなった。さらに、E3C1治療群の腫瘍内血管では、ペリサイトが抑制されていた。また、E3C1治療群ではTip cellの発現が亢進していた。以上のことより、E3C1で遺伝子治療を行うことにより腫瘍内の血管や血管周囲組織に影響を与え血流のない血管新生が起こること明らかとなった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
平成27年度までの研究で、ヌードマウス移植腫瘍のE3C1による腫瘍縮小は腫瘍血管の変化によるものであることが確認された。しかし、E3C1が腫瘍血管にどのように影響を及ぼしているかは解明されていなかった。それが、平成28年度の研究で血管周囲に存在するぺリサイトやTip cellに影響を及ぼしていることが明らかとなった。このことで、Del1による遺伝子治療の作用機序の解明や血管新生の解明に近づいたのではないかと考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
Del1のE3C1ドメインによる遺伝子治療で、腫瘍血管の微視的変化を確認することができた。今後はDel1のE3C1ドメインで遺伝子治療を行った腫瘍血管を電子顕微鏡で観察し検討したいと考えている。腫瘍血管を電子顕微鏡で観察することにより、血管内皮細胞に変化がもたらされているのか、それとも血管を取り巻く周囲の細胞に変化がもたらされているのかを明らかにしたいと考えている。その結果にもよるが、血管内皮細胞(HUVEC)を使用して細胞外基質タンパク(フィブリノーゲン)のゲル中で培養し、培養液中にE3C1を加え細胞の形態の変化を検討していきたいと考えている。
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