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2015 Fiscal Year Research-status Report

口腔扁平上皮癌の悪性度を規定する転写因子DEC-Twist分子制御機構の解明

Research Project

Project/Area Number 15K11274
Research InstitutionNihon University

Principal Investigator

Bhawal Ujjal  日本大学, 松戸歯学部, 助教 (50433339)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 谷本 圭司  広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 助教 (90335688)
Project Period (FY) 2015-04-01 – 2018-03-31
Keywords転写因子DEC1 / 転写因子DEC2 / 転写因子Twist1 / 口腔扁平上皮癌 / 上皮間葉移行
Outline of Annual Research Achievements

1.ヒトTwistプロモーターはヒトゲノム由来DNAを鋳型として、プロモーター領域に設定したプライマーを用いてPCRを行ない、得られたPCR産物をベクターに導入した。E-box結合領域の変異体は、QuickChange site-directed mutagenesis kit (Stratagene) によって変異導入用プライマーをそれぞれ用いて作製した。
2.レポーターコンストラクトおよび一過性細胞発現コンストラクトはLipofectamine PLUS (Invitrogen) によってHEK293 細胞に導入した。トランスフェクション24時間後、細胞は PBSで洗浄、Passive Lysis Buffer (Promega) を用いて溶解し、Dual-Luciferase® Reporter Assay System (Promega) によってホタルおよびウミシイタケルシフェラーゼ活性を測定した。
3.遺伝子導入24時間後に、同細胞からRNAおよびタンパクをmiRNeasy Mini Kit (Qiagen) を用いて抽出した。RNAは逆転写酵素でcDNAを合成後、DEC1, DEC2, Twistおよびβ-actin特異的TaqManプローブを用いてQuantStudio 6 Flexリアルタイム PCR システムにより定量化した。タンパク抽出にはRIPA Lysis Buffer (Pierce) を用いた。DEC1, DEC2およびTwistタンパク質の発現はWestern blot法で検討した。
4.ヒストンや非ヒストンタンパク質とDNAをクロスリンクするために、細胞や分離組織をホルムアルデヒドで固定した。可溶化後、クロマチンを酵素/ ソニケーション (Bioruptor UCD-250、Cosmo Bio)で断片化した。脱クロスリンク後、DNAを分析用に精製した。ChIPで得られたDNAはスタンダードまたは定量的PCRで分析した。
5.ヒト口腔扁平上皮癌組織のパラフィン切片を用いてDEC1、DEC2、およびTwistの免疫組織化学染色を行い、臨床病理学的因子との関連を検討した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

ヒトTwistプロモーターのクローニングと変異体の作成はうまくいったため、クロマチン免疫沈降法(ChIP)により転写因子、DNA修復タンパク質の結合の解析も可能になり、DEC-Twist分子制御機構の解明に着目できる。

Strategy for Future Research Activity

(1) C57BL/6、DEC KOマウスを用いて癌転移モデルを作製する。
(2) フローサイトメトリー法によりNK細胞の動態、活性化マーカーの発現を確認する。
(3) in vivoおよびin vitroにおいてTwistの概日リズム解析する。

  • Research Products

    (15 results)

All 2016 2015

All Journal Article (3 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results,  Peer Reviewed: 3 results,  Acknowledgement Compliant: 3 results,  Open Access: 1 results) Presentation (12 results) (of which Int'l Joint Research: 6 results,  Invited: 1 results)

  • [Journal Article] Differentiated embryo chondrocyte 1 (DEC1) is a novel negative regulator of hepatic fibroblast growth factor 21 (FGF21) in aging mice2016

    • Author(s)
      Fujita Y, Makishima M, Bhawal UK
    • Journal Title

      Biochemical Biophysical Research Communication

      Volume: 469(3) Pages: 477-482

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2015.12.045

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] DEC1 and DEC2 crosstalk between circadian rhythm and tumor progression2016

    • Author(s)
      Sato F, Bhawal UK, Yoshimura T, Muragaki Y
    • Journal Title

      Journal of Cancer

      Volume: 7(2) Pages: 153-159

    • DOI

      10.7150/jca.13748

    • Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
  • [Journal Article] Micromolar sodium fluoride mediates anti-osteoclastogenesis in Porphyromonas gingivalis-induced alveolar bone loss2015

    • Author(s)
      Bhawal UK, Lee HJ, Arikawa K, Shimosaka M, Suzuki M, Toyama T, Sato T, Kawamata R, Taguchi C, Hamada N, Nasu I, Arakawa H, Shibutani K
    • Journal Title

      International Journal of Oral Science

      Volume: 7(4) Pages: 242-249

    • DOI

      10.1038/ijos.2015.28

    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] MicroRNAs as biomarkers for Korean red ginseng-treated kanamycin-induced hearing loss in rats2016

    • Author(s)
      Bhawal UK, Rodriguez I, Kang TH
    • Organizer
      2016 International Conference on Ginseng
    • Place of Presentation
      Jeju Island, Korea
    • Year and Date
      2016-02-22 – 2016-02-24
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] 老化の病因の基礎となる生物学的解析2016

    • Author(s)
      Bhawal UK, Kobayashi R, Ochiai T, Hiratsuka K
    • Organizer
      第9 回 日本大学先端バイオフォーラム
    • Place of Presentation
      日本大学会館、千代田区、東京
    • Year and Date
      2016-01-27 – 2016-01-27
  • [Presentation] MicroRNA expression profiling and inhibition of inflammation of Korean Red Ginseng extract in rats on kanamycin-induced hearing loss2015

    • Author(s)
      Bhawal UK, Nam YH, Rodriguez I, Kim K, Ji MG, Hong BN, Kang TH
    • Organizer
      2015 Autumn Ginseng Conference
    • Place of Presentation
      Sungkyunkwan University, Suwon, Korea
    • Year and Date
      2015-11-27 – 2015-11-27
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] DNA microarray and microRNA analysis in low-level laser therapy (LLLT)-treated diabetic rat salivary glands2015

    • Author(s)
      Bhawal UK, Fukuoka CY, Simoes A, Kuboyama N
    • Organizer
      Keystone Symposia on Molecular and Cellular Biology
    • Place of Presentation
      ウェスティン都ホテル京都、京都
    • Year and Date
      2015-10-25 – 2015-10-29
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] BHLH transcription factor DEC2 negatively regulates TWIST1 and VEGF under hypoxia2015

    • Author(s)
      Sato F, Bhawal UK, Oikawa K, Muragaki Y
    • Organizer
      第74回日本癌学会
    • Place of Presentation
      名古屋国際会議場、名古屋、愛知
    • Year and Date
      2015-10-08 – 2015-10-10
  • [Presentation] Expression of isozymes of pyruvate kinase in oral and esophageal squamous cell carcinoma2015

    • Author(s)
      Kurihra M, Kirita T, Nakajima C, Sasahira T, Bhawal UK, Sasaki T
    • Organizer
      第74回日本癌学会
    • Place of Presentation
      名古屋国際会議場、名古屋、愛知
    • Year and Date
      2015-10-08 – 2015-10-10
  • [Presentation] Micromolar sodium fluoride mediates anti-osteoclastogenesis in Porphyromonas gingivalis-induced alveolar bone loss2015

    • Author(s)
      Bhawal UK, Arikawa K, Hamada N, Hiratsuka K, Nasu I, Arakawa H
    • Organizer
      2015 FDI Annual World Dental Congress
    • Place of Presentation
      Bangkok, Thailand
    • Year and Date
      2015-09-22 – 2015-09-25
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Crosstalk between DEC1-Twist1: distinct responses to senescence and implications for aging2015

    • Author(s)
      Fujita Y, Bhawal UK, Shimosaka M, Ishikawa M, Kusama H, Suzuki M, Koichi H, Shibutani K
    • Organizer
      2015 FDI Annual World Dental Congress
    • Place of Presentation
      Bangkok, Thailand
    • Year and Date
      2015-09-22 – 2015-09-25
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Distinct responses of transcription factor DEC1 to senescence and implications for aging2015

    • Author(s)
      Bhawal UK
    • Organizer
      Cold Spring Harbor Conferences Asia
    • Place of Presentation
      Grand Dushulake, Suzhou, China
    • Year and Date
      2015-09-14 – 2015-09-18
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Distinct responses of transcription factor DEC1 to senescence and implications for aging2015

    • Author(s)
      Bhawal UK, Kobayashi R, Ochiai T, Hiratsuka K
    • Organizer
      1st Annual Meeting of Japanese Society of Osteoimmunology
    • Place of Presentation
      ホテルブリーズベイマリーナ、宮古島、沖縄
    • Year and Date
      2015-06-30 – 2015-07-02
  • [Presentation] Micromolar sodium fluoride upregulates the osteoblastic differentiation marker mRNA expression in MC3T3-E1 cells2015

    • Author(s)
      Bhawal UK, Arikawa K,Taguchi C,Nakayama R,Hiratsuka K,Nasu I
    • Organizer
      第64回日本口腔衛生学
    • Place of Presentation
      つくば国際会議場、つくば、茨城
    • Year and Date
      2015-05-27 – 2015-05-29
  • [Presentation] Expression of CXCL14 and EGFR in oral cancer2015

    • Author(s)
      Nakayama R, Bhawal UK, Arikawa K,Taguchi C,Hiratsuka K,Nasu I
    • Organizer
      第64回日本口腔衛生学
    • Place of Presentation
      つくば国際会議場、つくば、茨城
    • Year and Date
      2015-05-27 – 2015-05-29

URL: 

Published: 2017-01-06  

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