口腔扁平苔癬におけるDNAメチル化の研究

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K11319
• Research Institution: Kyushu Dental College
• Principal Investigator: 矢田 直美 九州歯科大学, 歯学部, 准教授 (60468022)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: サイトカイン / DNAメチル化 / 口腔扁平苔癬

Outline of Annual Research Achievements

【目的】口腔扁平苔癬（oral lichen planus; OLP）は，口腔粘膜に角化異常を伴う慢性炎症性疾患であり，基底膜直下へのT細胞を主体としたリンパ球浸潤を特徴とする。また，OLPは数%で癌化が見られ，WHOでは口腔前癌状態に分類されている。近年，加齢や慢性炎症がDNAメチル化異常の誘発に関与し，癌化を引き起こしているとも考えられている。本研究の目的は，OLPにおける，DNAメチル化異常を検索し，OLPのDNAメチル化異常の癌化への関与と予測因子になりうるかを検討する。
【対象と方法】OLP，白板症，扁平上皮癌，OLP由来の扁平上皮癌のパラフィン切片よりDNAとRNAを抽出する。抽出したDNAにbisulfite処理を行う。リンパ球T細胞に関連するサイトカインのプロモーター領域から作成したプライマー(IL-5, -6, -8, -10, -13, INF-γ)を用いてmethylation-specific PCR (MS-PCR)を行う。total RNAを抽出し，cDNAへ変換し，各サイトカインプライマー(IL-5, -6, -8, -10, -13, INF-γ)について，real-time PCR法により発現を定量する。
【結果】OLP26例，白板症5例，扁平上皮癌6例，OLP由来の扁平上皮癌1例について，IL-5, IL-6, INF-γのプロモーター領域について検索を終了した。IL-8, IL-10, IL-13については，検索途中である。MS-PCR結果は，OLP 26例ではIL-5はメチル化・非メチル化が22例・4例，IL-6は，19例・7例，IFN-γは1例・25例，白板症5例ではIL-5は5例・0例，IL-6は，1例・4例，IFN-γは0例・5例，扁平上皮癌6例では，IL-5は6例・0例，IL-6とINF-γはいずれもすべて非メチル化であった。OLP由来の扁平上皮癌1例は，IL-5, IL-6が部分メチル化で，IFN-γは非メチル化であった。
【結論と考察】口腔扁平苔癬では，IL-5, IL-6のメチル化が高率に見られた。IL-5は扁平上皮癌で全例に見られ，癌化に寄与している可能性がある。また，IL-6のメチル化は扁平上皮癌では低率であり，炎症発生寄与している可能性がある。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

口腔扁平苔癬症例についてMS-PCR法による検索は，IL-10についてはPCRの反応を検出することが困難であり，プライマーを再作成し，再検索を行っている。メチル化と蛋白発現について検討しており，現在上記サイトカインについてreal-time PCRを行い，蛋白発現の検索を行っている。

Strategy for Future Research Activity

口腔扁平苔癬のサイトカイン発現量を定量し，DNAメチル化との相関をみていく。DNA, RNAの精製精度をあげていく。