2015 Fiscal Year Research-status Report
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15K11332
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| Research Institution | Hyogo Medical University |
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Principal Investigator |
高岡 一樹 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (60373122)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
浦出 雅裕 兵庫医科大学, 医学部, 特別招聘教授 (70104883)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 骨微小環境 / 破骨前駆細胞 / TGF-β |
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| Outline of Annual Research Achievements |
マクロファージ系破骨前駆細胞RAW264.7細胞をTGF-βで刺激し，細胞形態の変化を観察した．invasion assayを行い，細胞遊走能へのTGF-βの影響を検討した．RAW細胞にTGF-βおよびその阻害剤であるSB431542，RANKL投与を行い，Rho, Racタンパクの発現をウエスタンブロット法にて検討した．また，TGF-βおよびSB431542を投与した細胞にRANKL投与を行い，破骨細胞への分化をTRAP染色で検討した．【結果】TGF-β刺激により細胞形態は円型から紡錘形に変化し，遊走能は減少した．TGF-β刺激によりRhoの発現に変化はみられなかったが，Rac1の発現は減少した．RANKL併用投与によりさらにRac1発現が減少し，Rho発現も減少した．RAW細胞はRANKL投与により破骨細胞への分化が見られたが，SB431542の投与により分化は抑制された．【考察】遊走性の高い破骨前駆細胞はTGF-βの上昇した骨微小環境内で遊走能を消失し，骨リモデリング開始部に定着する．さらに骨芽細胞から提供されるRANKLにより，破骨前駆細胞はRac1発現の減少に伴い，安定，静止した破骨前駆細胞となり骨芽細胞とともに微小環境を形成し，破骨細胞へと分化していくと考えられた．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
RAW264.7細胞に対してTGF-βおよびその阻害剤であるSB431542，RANKL投与後の免疫染色（細胞運動マーカー，EMTマーカー）の検討が行えていない．ウエスタンブロット法におけるEMTマーカーの発現の変化が予想と異なっていたため，同実験に時間を要した．
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は，RAW264.7細胞をTGF-βおよびその阻害剤であるSB431542，RANKL投与後の細胞運動マーカーに絞って研究を進める予定である．
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| Causes of Carryover |
ウエスタンブロット法におけるEMTマーカーの発現の変化が予想と異なっていたため，同実験に関する費用が予定より増加したが，年度末に行う免疫染色の実験に進めなっかたため，その分の差が生じた．
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
免疫染色はEMTマーカーを省略して，運動マーカーを中心に行う予定であり，各種マーカーは購入済みや既存のものがある．免疫染色のための薬剤を購入する予定である．
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