ＲNＡ検出プローブを用いた新しい歯根膜幹細胞の単離方法の確立に関する研究

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K11346
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 川邉 紀章 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (00397879)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 片岡 伴記 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (50580180) ; 住吉 久美 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (80625161) [Withdrawn] ; 中村 政裕 岡山大学, 大学病院, 助教 (20708036)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: ヒト歯根膜幹細胞 / ＲＮＡ検出プローブ

Outline of Annual Research Achievements

本研究の目的は、ヒト歯根膜幹細胞に特異的に発現しているRNAを探索し、RNA検出プローブを用いて効率的にヒト歯根膜幹細胞を生細胞のまま同定・単離する方法を確立することである。この研究目的を達成するために、平成27年度の研究計画では「1.ヒト歯根膜幹細胞に特異的に発現するRNAの網羅的解析」と「2. RNA検出プローブの作成と、単離したヒト歯根膜幹細胞の幹細胞特性の検討」について検討する予定にしていた。このうち研究計画１については、マイクロアレイおよびRT-PCRによるRNA発現解析を行う必要があるため、研究計画調書に記載した通り「SP細胞（幹細胞）とNon-SP細胞（成熟細胞）」「SSEA-4陽性細胞（幹細胞）とSSEA-4陰性細胞（成熟細胞）」「脂肪細胞分化誘導前の細胞（幹細胞）と脂肪細胞分化誘導後の細胞（成熟細胞）」「骨芽細胞分化誘導前の細胞（幹細胞）と骨芽細胞分化誘導後の細胞（成熟細胞）」「軟骨細胞分化誘導前の細胞（幹細胞）と軟骨細胞分化誘導後の細胞（成熟細胞）」の組み合わせの細胞を作成し、それぞれからRNAの回収を行った。現在、これらのRNA標本のマイクロアレイおよびRT-PCR解析を行い、幹細胞集団に特異的に発現しているRNAのスクリーニングを進めているところである。研究計画２については研究計画１の結果を踏まえて行う必要があるので、研究計画１の結果が出た後に、速やかに開始する予定である。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

本研究では、ヒト歯根膜幹細胞に特異的に発現しているRNAを探索し、その結果をもとにヒト歯根膜幹細胞を同定・単離する最適なRNA検出プローブを作成することを目的としている。従って、研究計画の最初のRNA標本の準備は本研究の中で最も重要な段階である。平成27年度の研究ではこのRNA標本の準備を順調に整えることができ、マイクロアレイおよびRT-PCR解析へ進めることができたので、本研究はおおむね順調に進展していると考えられる。

Strategy for Future Research Activity

平成28年度では、平成27年度に引き続き研究計画１にあるRNA標本のマイクロアレイおよびRT-PCR解析を行い、幹細胞集団に特異的に発現しているRNAのスクリーニングを行う。これらのスクリーニングが完了次第、速やかに研究計画２で予定しているRNA検出プローブを作成する。

Causes of Carryover

平成27年度では当初の研究計画で予定していたRNA検出プローブの作成を行わなかったため、次年度使用額が生じた。また、当初予定していたよりも旅費・人件費・謝金の費用が少なかったことも、次年度使用額が生じた理由である。

Expenditure Plan for Carryover Budget

平成28年度では、平成27年度に行うことのできなかったRNA検出プローブの作成のために次年度使用額を使用する予定である。