2018 Fiscal Year Annual Research Report
Interaction analysis of NASH liver cancer pathogenesis by periodontal disease and diabetes
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15K11420
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
古堅 麗子 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(歯学系), 助教 (90253674)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
齋藤 俊行 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(歯学系), 教授 (10170515)
林田 秀明 長崎大学, 病院(歯学系), 講師 (20238140)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | 歯周病 / NASH / 相互作用 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
肝細胞がん(HepG2, Huh-7, SK-Hep-1)とヒト由来肝細胞、ヒト単球系細胞（THP-1）好中球様細胞に分化させたHL60を各種LPSで刺激後の細胞障害性および細胞増殖能をLDH Assay およびMTT Assayを用いて確認した。アポトーシスへの変化が予想される好中球様細胞に分化させたHL60については、Annexin-V,とPIの２重染色後、フローサイトメーターを用いてアポトーシスとネクローシス細胞の割合を解析した。各種LPSで刺激後のHMGB-1産生、ROS発現、ICAM-1やVCAM-1等の接着因子発現について、ELISA法およびRT-PCR, Western blotting法を用いて確認した。JNK、MAPK各種抗体（SP600125、LY294002、PD98059、SB203580）による処理後にLPS刺激後細胞のHMGB-1産生、ROS発現、接着因子発現の変化を解析し、関連するシグナル伝達経路について同定した。
24ウェルプレート下層にヒト由来肝細胞と肝細胞がん(HepG2, Huh-7, SK-Hep-1)、上層のインサート部にヒト単球系細胞（THP-1）か好中球様細胞に分化させたHL60、ヒト由来単球、好中球を入れ、共培養するための条件を整え、共培養時の遊走程度について解析した。各種LPSで刺激後のHMGB-1産生、ROS発現、ICAM-1やVCAM-1等の接着因子発現について、ELISA法およびRT-PCR, Western blotting法を用いて確認した。JNK、MAPK各種抗体（SP600125、LY294002、PD98059、SB203580）による処理後にLPS刺激後細胞のHMGB-1産生、ROS発現、接着因子発現の変化を解析し、関連するシグナル伝達経路について同定した。
さらに、単独および共培養にレジスチン、アディポネクチン、TNF-α添加時の細胞増殖生存活性の変化およびHMGB-1産生、ROS発現、各種接着因子発現の変化を解析した。また、高血糖培地に変えて、発現の変化を確認したが、有意な変化は認めなかった。
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