2015 Fiscal Year Research-status Report
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15K12138
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
澤井 哲 東京大学, 大学院総合文化研究科, 准教授 (20500367)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
片桐 晃子 北里大学, 理学部, 教授 (00322157)
木梨 達雄 関西医科大学, 医学部, 教授 (30202039)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 免疫細胞 / 走化性 / 細胞遊走 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
微小流路系を用いた勾配形成によって、ケモカイン刺激を高い精度で時空間的に変動、配置し、免疫細胞の運動と、先端形成に主要な役割を果たしているシグナルの活性化動態を生細胞測定から定量的に解析した。具体的には、微小流路系を用いた勾配形成によって、ケモカイン刺激を高い精度で時空間的に変動させ、ヒト好中球様HL60細胞並びにマウスproB細胞様BAF細胞の運動を定量的に解析した。微小流路は代表者らがこれまで用いてきた流路と、狭い組織内環境を模擬するために低い天井高の観察領域流路を二層のPDMSによって実現した改良型を用い、チャンバー内をフィブロネクチンでコートし、細胞を接着させ、精密な圧力制御によって変動させる勾配刺激のもと、先端形成の生細胞イメージングをおこない、その応答特性を特徴付けた。HL60にはケモカインとしてfMLP（細菌が産生するペプチド）を、Ba/f3にはSDF1を用い、刺激の可視化のためにはフルオセインまたはAlexaを用いた。その結果、細胞性粘菌でこれまでに研究代表者が特徴づけてきた進行波刺激に対する時空間特性がHL60細胞で見られることが明らかになってきた。さらに、細胞性粘菌との違いとして、極性が強く残る点が明らかになり、微小管の阻害剤やRockの阻害剤などによって極性の記憶の影響の解析を進めた。また、PI3キナーゼの活性化をAkt/PKBのPHドメインとGFP,RFPの融合タンパクの膜への移動として検出するセルラインを作出した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
人的リソース、並びに測定系のノウハウのマッチングが良く、計画通りに遂行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
昨年度までの測定をさらに発展させ、特徴づけた性質がプライマリー細胞においても成立しているかなどを検証する。また、PH-Aktに加え、Cdc42, Rho, Racの活性化パターンについてもFRETで測定する系を立ちあげ、走化性応答の時空間特性との関連を調べる。
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| Causes of Carryover |
翌年度に遺伝子改変実験が増えることが予想されるため、培地などの節約につとめたため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
試薬に利用
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