2015 Fiscal Year Research-status Report
アポトーシス細胞におけるクロマチンの細胞表層露出のメカニズム解明
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15K12210
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| Research Institution | Kanazawa Medical University |
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Principal Investigator |
岩淵 邦芳 金沢医科大学, 医学部, 教授 (10232696)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
砂谷 優実 金沢医科大学, 医学部, 助教 (70581057)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | アポトーシス / 細胞生物学 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
53BP1は、Tudor domainを介してDNA二重鎖切断(以下DSB)部位に出現するメチル化ヒストンH4(以下H4K20me2)と結合し、DSB部位に集積する。H4K20me2はJMJD2AまたはL3MBTL1に覆われているが、DSBが発生すると、ユビキチンリガーゼであるRNF8とRNF168依存性に、JMJD2Aは分解されL3MBTL1はH4K20me2から離れる。申請者は、アポトーシス細胞において53BP1がカスパーゼ依存性にTudor domain を含んだ60 kDaのC末断片になること、この53BP1C末断片がクロマチンと共に細胞表層へ露出することを見出した。53BP1C末断片がTudor domain を含んでいることから、アポトーシス細胞においても53BP1はTudor domain を介してヒストンH4と結合している可能性があるが、クロマチンの細胞表層露出は、RNF8、RNF168非依存性であった。即ち、アポトーシス細胞においては、ユビキチン化非依存性にJMJD2AおよびL3MBTL1がH4K20me2から離れる機序が存在することが考えられた。
細胞にアポトーシスを誘導すると、JMJD2Aはカスパーゼ依存性に分解された。JMJD2Aも、Tudor domainを介してH4K20me2と結合する。そこでカスパーゼ抵抗性のJMJD2AのTudor domainを高発現させると、アポトーシス誘導後もH4K20me2はJMJD2AのTudor domainに覆われ続けるため、クロマチンの細胞表層露出が抑制されるのではないかと考えた。今年度は、JMJD2A-Tudor domainの発現プラスミドを構築した。JMJD2A-Tudor domainには、カスパーゼで切断される可能性のある部位が6か所存在する。現在、これらの部位に変異を導入して、カスパーゼ抵抗性のJMJD2A-Tudor domainを発現するプラスミドを構築している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
JMJD2Aのtudor domainをカスパーゼ耐性とするための変異導入に手間取っているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
引き続きJMJD2A tudor domainへの変異導入に努める。Jurkat細胞にカスパーゼ耐性のJMJD2A-Tudor domainを高発現させると、アポトーシス細胞におけるクロマチンの細胞表層露出が抑制されるか否かを調べる。
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| Causes of Carryover |
平成28年度以降の研究補助員人件費を確保するため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
研究補助員人件費および物品費として使用する。
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Research Products
(7 results)
