2016 Fiscal Year Annual Research Report
Analyses of neuronal ensemble interactions
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15K14314
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
松尾 直毅 大阪大学, 医学系研究科, 准教授 (10508956)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 記憶学習 / マウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
文脈依存的恐怖条件付け学習時に活動した神経細胞集団を選択的に標識し、後に人為的に活動操作を行うために、代表者らが以前に開発したimmediate-early genesの一つであるc-fos遺伝子のプロモーターとテトラサイクリン発現誘導系を組み合わせた遺伝子改変マウスのシステムを活用した。このシステムを活用して研究初年度に、チャネルロドプシン（ChR2）もしくはhM3Dq型のDesigner Receptors Exclusively Activated by Designer Drug（DREADD）をtetOプロモーターの制御下で発現するトランスジェニックマウスを作製した。これらのうち、ChR2を発現するトランスジェニックマウスに関しては発現がleakyであったため、hM3Dqを発現するトランスジェニックマウスのみを研究に用いた。さらに、アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターを用いた遺伝子発現のシステムも構築した。これらのトランスジェニックマウスもしくはAAVベクターを用いたシステムにより、文脈依存的恐怖条件付け学習時に活動した脳内の特定の神経アンサンブルを標識し、海馬もしくは体性感覚皮質、視覚皮質などの大脳新皮質の神経アンサンブルをhM3Dqの特異的合成リガンドであるCNOの投与により選択的な再賦活化を行った。このCNO投与による記憶学習行動の変化、および活動した神経細胞の全脳に渡る可視化同定をimmediate-early geneであるc-FosもしくはZIFに対する免疫化学組織染色法により行った。これらの活動神経細胞の脳領域、細胞集団の性質などの解析を行った。
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