2016 Fiscal Year Annual Research Report
Development of antigen specific immune cell therapy based on Crispr/Cas9 genome editing system
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15K14404
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| Research Institution | Chiba University |
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Principal Investigator |
植松 智 千葉大学, 大学院医学研究院, 教授 (50379088)
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2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | Crispr / Cas9 / ゲノム編集 / 細胞傷害性T細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
抗原特異的な免疫細胞を適切に誘導しそれらを有効に用いることによって、様々な疾患において新たな治療を行うことが可能であり、特にがん細胞が持つ特異抗原に対する免疫を誘導することによって排除を行うがん免疫細胞療法が近年注目されている。
本研究課題では、CRISPR Cas9システムを用いてナイーヴT細胞のT細胞受容体アルファ鎖、ベータ鎖のゲノム編集を行い、人為的にがん抗原特異的CTLを作成する技術開発を行い、本細胞の抗腫瘍効果の検討を行なった。まずナイーヴCD8+T細胞に対するゲノム編集を実現するため、一般的なspCas9およびgRNAを導入したウイルスベクター、Plasmidベクターを用いてゲノム編集を試みたが、遺伝子導入効率が非常に低く、これらの方法では実現できなかった。そこでin vitro条件下で形成させた改良型SpCas9リコンビナントタンパク質/人工合成gRNA複合体を、電気穿孔法を用いて細胞内に導入する技術の開発を進めてきた。その結果、マウスCD8+T細胞において超高効率でCas9 gRNA複合体を導入し、標的遺伝子のゲノム編集を可能とするゲノム編集技術の開発に成功した。一方、ヒト悪性黒色腫に対するがん抗原human(h) gp100ペプチドを抗原とし、C57BL/6マウスに免疫を行い、得られたhgp100特異的CTL集団から、hgp100がん抗原特異的TCRクローンを同定することに成功した。続いて前述のゲノム編集技術により得たTCR欠損CD8+T細胞に対して、本hgp100がん抗原特異的TCR遺伝子を導入することでhgp100/H-2Db反応性のCTLの作成に成功した。本細胞に対してB16メラノーマ細胞株を用いてin vitro及びin vivoの条件下における抗腫瘍効果の検討の結果、本細胞は高い抗腫瘍活性を有することが明らかとなった。
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Research Products
(13 results)
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[Journal Article] G-CSF-induced sympathetic tone provokes fever and primes anti-mobilizing functions of neutrophils via PGE2.2017
Author(s)
Kawano Y, Fukui C, Shinohara M, Wakahashi K, Ishii S, Suzuki T, Sato M, Asada N, Kawano H, Minagawa K, Sada A, Furuyashiki T, Uematsu S, Akira S, Uede T, Narumiya S, Matsui T, Katayama Y.
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Journal Title
Blood.
Volume: 129(5)
Pages: 587-597
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Inhaled Fine Particles Induce Alveolar Macrophage Death and Interleukin-1α Release to Promote Inducible Bronchus-Associated Lymphoid Tissue Formation.2016
Author(s)
Kuroda E, Ozasa K, Temizoz B, Ohata K, Koo CX, Kanuma T, Kusakabe T, Kobari S, Horie M, Morimoto Y, Nakajima S, Kabashima K, Ziegler SF, Iwakura Y, Ise W, Kurosaki T, Nagatake T, Kunisawa J, Takemura N, Uematsu S, Hayashi M, Aoshi T, Kobiyama K, Coban C, Ishii KJ.
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Journal Title
Immunity.
Volume: 45(6)
Pages: 1299-1310
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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