2016 Fiscal Year Annual Research Report
Identification of stem cells by developing next generation lineage tracing methods
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15K14531
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| Research Institution | Kansai Medical University |
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Principal Investigator |
上野 博夫 関西医科大学, 医学部, 教授 (60332368)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
厚海 奈穂 関西医科大学, 医学部, 助教 (90612151)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 幹細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
Cre-loxpシステムを用いて幹細胞とその子孫細胞を蛍光タンパク質などのレポーター遺伝子によって標識する細胞系譜追跡法は、単細胞レベルで生体外に単離して移植する等の研究手法が使えない成体幹細胞にとって非常に強力かつ有用な研究手法である。細胞系譜追跡法を用いれば幹細胞を生体外に取り出すこと無く標識し、in situにてその命運を視覚化することが可能である。しかしながら、現在一般的に行われている方法では、レポーター分子が１種類であるために、異なる幹細胞由来クローンを区別できず、また、研究対象組織の幹細胞に非常に特異的なマーカーが存在する場合には有用であるが、そうでない場合には使えなかった。一方、フローサイトメトリーを用いた成体幹細胞単離においては、複数の幹細胞マーカーを組み合わせる事で単離する幹細胞の純度を上げる事が一般的になっている。今回の研究プロジェクトではフローサイトメトリーの利点を細胞系譜追跡法に導入し、２種類のマーカー陽性細胞を始めて標識するレポーターマウスを作製した。
すなわち、①２種類のマーカー遺伝子共陽性細胞を特異的に標識するレポーターコンストラクトををRosa26tkneoベクターに組み込み、をR1 ES細胞のRosa領域にノックインしたクローンを得た。また、②２種類のマーカーを使って２段階に細胞を標識するコンストラクト（double lineage tracing)のコンストラクトを作製した。このコンストラクトをやはりR1 ES細胞のRosa領域にノックインしたクローンを得た。
以上の２クローンを個体化しマウスラインを得、現在これらが機能することを確認中である。
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[Journal Article] Intestinal cancer stem cells marked by Bmi1 or Lgr5 expression contribute to tumor propagation via clonal expansion2017
Author(s)
Hirotsugu Yanai, Naho Atsumi, Toshihiro Tanaka, Naohiro Nakamura, Yoshihiro Komai, Taichi Omachi, Kiyomichi Tanaka, Kazuhiko Ishigaki, Kazuho Saiga, Haruyuki Ohsugi, Yoko Tokuyama, Yuki Imahashi, Shuichi Ohe, Hiroko Hisha, Naoko Yoshida, Keiki Kumano, Masanori Kon and Ueno H.
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Journal Title
Scientific Reports
Volume: 7
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Non-equivalence of Wnt and R-spondin ligands during Lgr5+ intestinal stem cell self-renewal2017
Author(s)
KS Yan, CY Janda, J Chang, GXY Zheng, KA Larkin, VC Luca, LA Chia, AT Mah, A Han, JM Terry, A Ootani, K Roelf, M Lee, J Yuan, X Li, CR Bolen,J Wilhelmy, PS Davies, H Ueno , RJ von Furstenberg, P Belgrader, SB Ziraldo, H Ordonez, SJ Henning, MH Wong, MP Snyder, IL Weissman, AJ Hsueh, TS Mikkelsen, KC Garcia, and CJ Kuo
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Journal Title
Nature
Volume: -
Pages: -
Int'l Joint Research
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[Journal Article] Bmi1-positive cells in the lingual epithelium could serve as cancer stem cells in tongue cancer2016
Author(s)
T Tanaka, N Atsumi, N Nakamura, H Yanai, Y Komai, T Omachi, K Tanaka, K Ishigaki, K Saiga, H Ohsugi, Y Tokuyama, Y Imahashi, H Hisha, N Yoshida, K Kumano, K Okazaki, and Ueno H
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Journal Title
Scientific Reports
Volume: 6
Pages: -
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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