2017 Fiscal Year Annual Research Report
Conjugation manner of natural plasmids to plural recipient candidates
| Project/Area Number |
15K14686
|
|---|
| Research Institution | The University of Tokyo |
|---|
Principal Investigator |
野尻 秀昭 東京大学, 生物生産工学研究センター, 教授 (90272468)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
|
| Keywords | Pseudomonas / plasmid / conjugation |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
平成28年度までに、ナフタレン分解プラスミドNAH7の液体中での接合（供与菌1種と受容菌1種あるいは2種、それぞれ1：1接合と1：2接合）では、供与菌と同種・異種の2種の受容菌存在下（1：2接合）で、異種の受容菌候補への接合伝達頻度が1：1接合の場合と比べて大きく低下すること、NAH7を保持するKT2440株から2種の受容菌のうち有意に異種の受容菌候補（CA10dm4株）への接合伝達頻度を上げるKT2440株染色体の領域をBACライブラリーからスクリーニングし少なくとも10箇所の領域（50～150 kbのDNA断片を含む）に存在する遺伝子が関与することを明らかにした。平成29年度は、KT2440株染色体上に存在する上記受容菌選択性の原因因子を同定するため、BACライブラリーへのトランスポゾン（Tn）変異導入を用いたスクリーニング法を構築した。また、上記はNAH7の挙動だが、このような挙動は各種のプラスミドごとに傾向が異なる。そこで、BACライブラリーを利用した宿主側原因因子のスクリーニングと平行してNAH7上にあると想定される原因因子のスクリーニングも行った。染色体の場合と同様にTn変異導入を利用して、（1）CA10dm4株への接合伝達頻度自体が上昇した、（2）KT2440株への接合伝達頻度との比が上昇した、という2つのカテゴリーで受容菌の選択性が減少した変異体をスクリーニングした。1次スクリーニングにより、選択性の減少度合いが様々な27種の候補遺伝子を取得し、さらに検出限界を下げた（より感度を上げた）2次スクリーニングを行って、最終的に8つの候補遺伝子を取得した。現在、Tn変異により破壊された遺伝子のシーケンスを実施している。
|
